你們細胞是怎麽凍(dòng)存的?求解!!!我的是4度冰箱放半小時,-20度冰箱半小時,然後轉移到-80度冰箱!但是放在-80度冰箱1個(gè)月後,細胞複(fù)蘇就感覺狀态不太好瞭(le)!!
做實驗前要先學會凍(dòng)存，以備(bèi)自己在後面的實驗中能保持同一來源、穩定可靠的細胞，且可減少污染或其它不利影響。
1、影響凍(dòng)存細(xì)胞活性的因素
（1）細胞凍(dòng)存保護劑：常用的有二甲基亞砜（DMSO）和甘油，常用的濃度爲5%-10%（90%小牛血清）。DMSO對(duì)二倍體細胞的毒性較甘油小 。
（2）細胞懸液的凍(dòng)結速度：慢凍(dòng)時冰凍(dòng)在細胞外形成，因此不緻損害細胞。多數細胞以每分鍾下降1℃的速度，降至-20℃凍(dòng)結。均可獲(huò)得滿意效果。
（3）保存溫度：液氮罐，可達(dá)到-196℃，此時所有的物理化學活動均降至zui低限度，以保證細胞長(zhǎng)期保存。
（4）複蘇：急速融化複蘇可防止損害細胞。凍(dòng)結細胞從(cóng)液氮中取出後，應立即放入37℃~43℃的水浴中 ，30秒至一分鍾内融化。
瞭(le)解瞭(le)影響凍存的因素，上海恒遠生物在爲您解析八大要素，用於(yú)保存細胞株。歡迎閱讀參考。
1. 紫外消毒30min後關閉(bì)紫外燈(dēng)，開啓超淨台正常工作狀态，用酒精消毒操作者的雙手 。
2. 将所需的培養基 ，胰酶確(què)保瓶身幹淨後放於(yú)工作台面内 ，點燃酒精燈 ，将培養基和胰酶瓶口用酒精棉球擦拭後，再将瓶口對準在酒精燈上消毒2-3次，旋開瓶蓋後再次分别消毒瓶口和瓶蓋，分别放於(yú)酒精燈的兩側。特别是将培養基瓶放於(yú)斜架上，瓶口對準酒精燈，且放在距離酒精燈zui近的位置，瓶蓋置於(yú)酒精燈的另一側。
3. 将培養瓶瓶口在酒精燈上消毒2-3次，旋開後分别再次消毒瓶口和瓶蓋2-3次 ，蓋放於(yú)酒精燈右側(cè)後将培養瓶内的培養液懸空倒進污缸，在酒精燈消毒2-3次瓶口，豎直放好。取1ml移液器快速移動在酒精燈上消毒1-2次，然後再裝上槍頭吸取1.5ml胰酶液，懸空移入培養瓶内。
4. 将培養使胰酶浸沒整個瓶壁的細胞層，計時約40s，立馬豎起對著(zhe)燈光可觀察到細胞與細胞之間有針孔樣縫隙，並(bìng)有1-2個細胞脫落，這時爲胰酶消化的zui适時機 。若看到成片的細胞從瓶壁脫落爲胰酶消化過度；若看不到針孔樣縫隙和細胞脫落，則需繼續消化，輕輕的迅速平放培養瓶使胰酶浸沒細胞層1s後迅速豎起對著(zhe)燈光觀察細胞情況，可反複幾次，直至出現針孔樣縫隙和1-2個細胞脫落的*消化狀态。用移液器将胰酶吸淨。
5. 吸取1ml細胞凍存液於(yú)培養瓶内，並(bìng)用移液器吸取少量的培養基輕柔的反複沖洗培養瓶壁5-8次，使貼壁細胞*脫落於(yú)培養基内再輕輕吹打2-3次，使細胞盡可能處於(yú)單個懸浮狀态 。
6. 将1ml含有細胞的凍(dòng)存液移入新的保種管内，擰緊瓶蓋(gài)，做好實驗标記。
7. 将培養基瓶口和瓶蓋消毒2-3次後擰緊，熄滅酒精燈(dēng)，整理實驗台面，取出實驗試劑及污缸等，關閉(bì)超淨工作台。
8. 将保種管先放於(yú)4℃冰箱 30min後拿出放置-20℃冰箱過一夜，次日再放於(yú)-80℃的冰箱内3-4天，zui後存放於(yú)-196℃的液氮灌内長(zhǎng)期保存。
注此過程也可簡化因實際操作過程中經驗所得 ：步驟7結束後将保種管用幹脫脂棉包裹後膠帶(dài)封好直接放於(yú)-80℃冰箱内4-5天，即可放於(yú)液氮灌保存。但-80℃冰箱也可保存細胞株2-3月。
上海恒遠生物，專業細胞供應商，低價供應細胞株。提供細胞鑒定!爲您提供的服務，爲您順利進行科研項目保駕(jià)護(hù)航。提供細胞鑒定!
點擊交流