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本周焦點:簡述ELISA試劑盒固相抗結合原理

  • 發布日期 :2017-05-10      浏覽次數:1654
    • 本周焦點:簡述ELISA試劑盒固相抗結合原理

         已包被抗原或抗體的固相載體在低溫並(bìng)且幹燥的條件下 ,一般可以保存6個月,而有些不完整的試盒,僅供應包被用抗原或抗體,檢測(cè)人員需自行包被。


        在ELISA測定過程中作爲吸附劑和容器 ,不參(cān)與化學反應。可作ELISA試劑盒中載體的材料很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能,抗體或蛋白質抗原吸附其上後仍保留原來的免疫學活性,加之它的價格低廉,所以被普遍採(cǎi)用。聚苯乙烯爲塑料,可制成各種形式。


         在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應,即加标本和加酶結合物後。ELISA試劑盒抗原抗體反應的完成需要有一定的溫度和時間,這一保溫過程稱(chēng)爲溫育,有人稱(chēng)之爲孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。


         加入闆孔中的标本,其中的抗原並(bìng)不是都有均等的和固相抗結合的機會,隻有zui貼近孔壁的一層(céng)溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個逐步平衡的過程,因此需經擴散才能達到反應的終點。在其後加入的酶标記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是爲什麽ELISA反應總是需要一定時間的溫育。


         從理論來說,溫育採(cǎi)用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃(冰箱溫度)等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合适溫度。在建立ELISA方法作反應動力學研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應一般在37℃經1-2小時,産(chǎn)物的生成可達。

       

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