針對elisa實驗樣本收集及保存恒遠生物提幾點建議

   elisa（酶聯免疫試驗）以其靈敏度較高、特異性好的特點已廣泛用於(yú)科研實驗研究，越來越多科研單位選擇用elisa實驗方法完成研究課題。的試劑、好的儀器和正確(què)的操作是保證elisa試劑盒檢測結果準確(què)可靠的必要條件，但樣本的收集及保存操作不當也會影響elisa實驗結果。樣本的收集跟保存聽上去貌似很簡單，但不乏有許多科研工作者因爲樣本的收集跟保存沒做好而影響實驗結果。


下面針對elisa實驗樣本收集及保存恒遠生物提幾點建議：
1.嚴重溶血，以HRP爲标記的ELISA測定中，殘留在孔内的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性，催化底物顯色造成假陽性；
2.混有紅細胞的血清易沉澱或附著在聚乙烯孔内不易洗淨；如有細菌污染，菌體中可能含有内源性HRP，也會産生假陽性反應：
3.标本凝固不全，有時爲瞭争取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；
4.採血試管洗滌不*、反複使用易交叉污染：塑料試管能吸附抗原物質，樣本久置在塑料管内會使樣本内抗原含量下降造成假陰性。
   血清标本宜在新鮮時檢測，嚴重溶血标本禁用。一般說來，在5天内測定的血清标本可放置於4℃，标本在冰箱中保存時間過長導緻血清IgG聚合，使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需－20℃保存。凍結血清融解後，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻並避免産生氣泡。混濁或有沉澱的血清标本應先離心或過濾，澄清後再檢測。反複凍融會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清标本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存；使用一次性玻璃試管或真空管採血管；並使用非抗凝标本，肝素抗凝血漿會增加OD值，可能與高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶标記物不易洗脫有關；EDTA、酶抑制劑（如NaN3）可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性；血液标本採集後必須使其充分凝固後再分離血清，或标本採集時用帶分離膠的採血管或於採血管中加入适當的促凝劑。
   被檢血清或血漿标本，可用含保護性封阻劑（吐溫-20）或稱濕潤劑的緩沖液來稀釋。也可加入一些蛋白質，如1%牛血清白蛋白等來稀釋。然後再加到已經用抗原或抗體包被的固相載體中進行孵育。此種被試标本可作一系列稀釋度測定，也可用一個稀釋度測定。對於作某一個傳染病的診斷來說，先用一系列稀釋度作一批标本測定，求出對診斷有意義的一個稀釋度（即測定劑量反應曲線），然後用一個稀釋測定即可。zui适稀釋度和孵育時間均需從實踐中摸索出來，對一般病原微生物所引起的傳染病的血清學診斷，以1：200稀釋度測定比較适當，而試驗标本的(即含抗體)作用時間一般爲室溫或37℃ 1-2小時。但現在對有些标本（如流腦抗原）測定時，僅用37℃ 5分鍾。對單克隆抗體檢測也可縮短作用時間。