恒遠科普:爲什麽一定要挑取單克隆?

恒遠科普:爲什麽一定要挑取單克隆?
  當從甘油保存的細菌或者穿刺菌中複蘇細菌時，從瓊脂闆上挑取單菌落再液體培養顯得尤爲重要
。
  爲什麽呢？由於甘油菌或穿刺菌中的大多數細菌細胞在遺傳上應該是相同的，但是偶然情況下，會存在個别隐藏的突變細菌。如果你隻是簡單的從混合菌落中挑選瞭一團細菌，然後在液體培養基中培養，那麽突變的細菌就有可能會接管整個培養物，從而影響您的實驗。我們可以通過劃線挑選單個菌落的方式來解決問題。在這種情況下，每個單獨的菌落就是單克隆，即它們在遺傳學上是相同的。使用這些單克隆菌落形成的液體培養物，将會獲得預期的質粒産率並在後期試驗中獲得更一緻的結果。
劃線前需要準備哪些材料？
正式開始培養前，我們需要收集一些必要的材料。
首先是含有你感興趣質粒的甘油菌或穿刺菌；
其次是含有合适抗生素的LB瓊脂平闆；
無菌的牙簽或者無菌的接種環；
酒精燈或其他火焰；
30或37攝氏度的幹燥培養箱；
zui後是良好的無菌操作技術
。
劃線培養的方法是什麽？
   首先，我們取出含有适當抗生素的LB瓊脂平闆，確保平闆上沒有污染並且幹燥。如果平闆上有水珠，你可以把它打開然後放在火焰下約10分鍾來風幹。接下來，我們要看一下我們的穿刺菌，確保其中有可見的細菌生長。然後取一個無菌的牙簽，把它插入並接觸到有細菌生長的穿刺區域，這個過程也可以是将無菌的牙簽浸入到半融化的甘油菌當中。請注意的是
，在牙簽上你不需要看到肉眼可見的一團細菌，看起來很幹淨的牙簽表面可能已經被細菌充分覆蓋瞭。
    用牙簽輕輕地從平闆的邊緣附近開始劃線，牙簽與平闆接觸角度大概在45度左右。請注意一定要輕輕的劃線
，不要用牙簽刺破平闆，否則你就會在劃線過程中将瓊脂翹起來。在劃線時要遵循一定的路徑，並且需在每個新路徑開始時用一根新的無菌牙簽。用*根牙簽劃線時，我們需要輕輕地連續劃線大約至1/3平闆大小，並注意避免碰到平闆的邊緣。扔掉*根牙簽，並轉動平闆，然後使用一根新無菌牙簽從上一次結束的地方開始連續劃線約 1/3區域，並在靠近邊緣的地方結束。zui後，我們用第三根牙簽再重複一次這一過程。盡管，這個過程會很快，我們仍需要很細心。
   需要確保在培養之前平闆是*幹燥的。這是由於，如果細菌在平闆上是一層液體的話，它們有可能會在平闆上擴散並形成一層菌群而不是單個的菌落。需要注意的是，要将平闆倒置放入培養箱中，以避免冷凝的液體會滴到菌落上而幹擾它們的生長。現在我們已經完成瞭劃線，我們将平闆倒置放入培養箱中過夜或者至少培養12小時。您就看到精心劃線後會有單個菌落出現，之後就可以挑取單個菌落以便用於下遊各種各樣的實驗。