ELISA免疫測定,您真的掌握透徹瞭嗎?

    ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之後發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用於生物學和醫學科學的許多領域。ELISA免疫測定,您真的掌握透徹瞭(le)嗎?不要著(zhe)急，接著(zhe)往下看！


ELISA免疫測定目的是？
1.測定體液中的各種蛋白質
，包括含量極少的蛋白質如甲胎蛋白等；
2.測定激素，包括小分子量的甾體激素等；
3.測定抗生素和藥物；
4.測定病原體抗原，HBsAg、HBeAg等；
5.利用純化的抗原檢測标本中的抗體，例如抗-HBs等；


ELISA免疫測定原理：
①使抗原（或抗體）結合到某種固相載體表面，並保持其免疫活性；
②使抗原（或抗體）與某種酶聯結成酶标 抗原（或抗體），而且此酶标抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；
③測定時将受檢标本（抗體或抗原）和酶标抗原（或 抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原或抗體進行反應，再用洗滌方法使固相載體上形成的抗原抗體複合物與其它物質分開
，zui後結合 在固相載體上的酶量與标本中受檢的抗體或抗原量成一定比例；再加入酶反應底物後，底物被酶催化後變爲有色産物，根據其顔色反應的 深淺進行定性或定量分析，以瞭解被測标本中抗體或抗原含量。


ELISA免疫測定步驟：
1.包被；
2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml於上述已包被之反應孔中，置37℃孵育1小時。然後洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)；
3.加酶标抗體：於各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶标抗體(經滴定後的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小時，洗滌。
4.加底物液顯色：於各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鍾；
5.終止反應
：於各反應孔中加入2M硫酸0.05ml；
6.結果判定：可於白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔内顔色越深，陽性程度越強，陰性反應爲無色或極淺。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，於450nm處，以空白對照孔調零後測各孔OD值。


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