全自動生化分析儀由於其清洗系統的工作模式所緻,常出現一個項目對緊随其後的一個甚至幾個項目的測定帶來一定程度的試劑污染,並随著儀器使用時間的累加,儀器狀況的下降,試劑交叉污染的程度會有所增加。在實際工作中主要表現爲某一項目的測定結果一直符合實驗要求,可是一段時間以後測定結果趨高,並且日益明顯;而單獨測定該項目時測值又合理起來,給日常工作帶來極大的不便。因此避免試劑間的幹擾非常重要。
試劑間的幹擾原因:
試劑中含有下一測試所要測定的底物,或是含有的某種試劑成分與下一反應所要測定的底物有作用,因而直接幹擾下一反應的測定結果;
該試劑所引導的反應對下一項目的反應進程帶來瞭間接的幹擾,因爲在有試劑污染的情況下,下一項目所測定的是前後兩個項目反應的綜合作用結果。下面通過對試劑成分的分析和相應試驗來找出試劑交叉污染可能帶來的情況,進而指導相應的項目調整和結果分析。
試劑間可能發生的幹擾情況:
ALT(IFCC)、AST(IFCC)試劑中含有高活力LD成分,有可能會對LD的測定帶來幹擾;
ALP(IFCC)、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)、CO2(PEPC)、α-Amy(EPS)等試劑中使用磷酸緩沖液,可能會對其後的Mg2+測定帶來幹擾;
ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、UA(Uricase)、α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液,可能會對無機磷的測定帶來幹擾;
CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)試劑中含有Glu成分,其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應過程,因此可能對Glu測定帶來幹擾,尤其對Glu的HK法測定可能帶來嚴重幹擾;
Mg2+試劑(Calmagite)中含有EGTA成分,爲Ca2+絡合劑,可能對Ca2+的測定帶來幹擾;
個别試劑以甘油做酶的保護劑,因此可能對TG的測定帶來幹擾,等等;
低密度脂蛋白、甘油三酯、膽固醇的試劑成分中都含有CE、CHOD、POD酶,都會與血清成分反應,生成的中間反應産物是H2O2濃度,因爲低密度脂蛋白和甘油三酯檢測單位都是mmol/L級,而尿酸檢測單位是μmol/L級,二者之間相差1 000倍,故檢測尿酸的反應杯中隻要殘留極少量的低密度脂蛋白和膽固醇試劑就可産生大量的H2O2,直接導緻尿酸的檢測結果的升高;
葡萄糖對尿酸試劑的幹擾GLU(OX)與UA測定原理均採用Trider's反應方法,試劑探針殘留攜帶的GLU帶入到UA反應體系,發生血糖反應其産物紅色醌亞胺與UA産物紅色醌亞胺顔色疊加,而血清中正常血糖含量遠高於尿酸水平,從而導緻UA結果嚴重偏高;
膽固醇(TC)、甘油三醋(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL)會對總膽汁酸檢測的影響,導緻膽汁酸測定值增加。這些試劑中爲瞭保證反應充分,往往含有膽酸鈉成分或是一些脂類水解促進劑等,這些物質導緻瞭樣本膽汁酸測定的攜帶性增高及内源産物等副反應性增高;
谷丙中的含有的酮戊二酸NADH反應體系會幹擾總膽汁酸檢測中的Thio-NAD-Thio-NADH循環指示體系,導緻測定值偏低;
由於各個試劑公司所提供的産品說明書常不能全面反映試劑的組成情況,所以通過實驗發現試劑交叉污染可能帶來的幹擾變得很重要。
下面以兩個試驗來加以說明:
A、将試劑作爲樣本進行全套項目測定,根據結果確定發生試劑交叉污染時造成直接幹擾的項目。
B、将一份樣本分爲兩份,一份加生理鹽水或其他适當的稀釋液,另一份加等量的試劑,同時測定、考察結果的變化,進而確定可能發生試劑交叉污染時造成幹擾的項目。進行這一實驗時,使用半自動生化分析儀可能會得到更爲理想的結果,尤其是針對雙試劑反應時,R1、R2加入時機可以得到更爲的控制。
此外,由於試劑成分的複雜多樣性,實時儀器狀況的*性,可能發生的試劑間的交叉污染的情況不盡相同。
試劑間的交叉污染會影響結果的準確性,因此隔絕二者間的非常重要。一般在安排項目順序時要求兩個項目間至少要有一個非幹擾項目,而zui*的做法則是将被幹擾項目置於幹擾項目之前以消除幹擾。同時要求檢驗人員對儀器的工作狀态要瞭如指掌,並在一個樣本的項目選擇或一個樣本的zui後一項與下一樣本的*個項目選擇時對於試劑交叉污染的可能性加以考慮,合理安排項目順序,以便得到更爲合理的結果。
通常情況下可以按照以下順序安排項目:ALT、AST、ALP、γ–GT、ChE、TP、Alb、TBIL、DBIL、Urea、UA、Cr、CK、CK-MB、α–HBDH、LD、Glu、TG、TC、HDL-C、LDL-C、ApoAI、ApoB、α–Amy、CO2、P3-、Fe3+、Ca2+、Mg2+。
實際工作中,用全自動生化分析儀進行連續的多個項目的測定,每個反應的詳細過程難以探知,因此理論分析結合實際應用方可摸索出符合本單位工作的方法。
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