1.如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會使産(chǎn)品質量受損?
将血清從(cóng)冷凍箱取出後,先置於(yú)2~8℃冰箱使之融解,然後在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。
長(zhǎng)時間儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉澱或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,並(bìng)避免反複凍融。
我們建議血清應保存在-2O℃。若存放於(yú)4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)的滅菌容器内,再放回冷凍。
2.血清中包含絮狀沉澱(diàn),它們是什麽,怎麽處(chù)理?
沉澱包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響産品性質。要除去沉澱,離心血清(400g,1-2分鍾)或者簡單的讓其沉澱在瓶子底部,将血清小心的轉移到另一個無菌瓶裏(一般不建議採(cǎi)用過濾的方法除去沉澱,因爲沉澱會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉澱並(bìng)加熱至37℃就會再溶解。所以,使用産品時要搖動並(bìng)加熱血清至37℃,沉澱會自然消失。
3.培養基中添加瞭(le)血清和抗生素後,可長(zhǎng)期保存嗎?
一旦您在新鮮培養基中添加瞭(le)血清和抗生素時,您應該在兩到三周内使用它。因爲一些抗生素和血清中的基本成分在解凍(dòng)後就開始降解。
4.爲什麽要熱滅活血清?
加熱可以滅活補(bǔ)體系統。激活的補(bǔ)體參(cān)與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小闆釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學 研究,培養ES細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
5.有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經過正確(què)處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長隻有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因爲高溫處理影響瞭(le)血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉澱物的形成會顯著的增多,這些沉澱物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以爲是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉澱物更增多,使研究者誤認爲是微生物 的分裂擴增。
若非必須,可以不需要做熱處(chù)理這一步。不但節省時間,更確(què)保血清的質量!
6.細(xì)胞培養中如何防止黑點(diǎn)生成?
(1) 盡可能地減(jiǎn)少血清凍(dòng)融次數。
(2) 培養(yǎng)基無(wú)需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持*PH值7.0- 7.2。
(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質,容器定期刷洗。
(5) 掌握細胞傳(chuán)代的*時機,細胞切勿生長(zhǎng)過老。
血清保存和使用須注意:血清應保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ,應先将血清至於(yú)2-8℃冰箱,並(bìng)經常搖勻使之溶解,然後至室溫放置使之升溫,不可将冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,如放在37℃解凍,顔色加深,粘稠度也會增加,血清在解凍和熱滅活後,應按用量分裝並(bìng)於(yú)-20℃保存,避免反複凍融。
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