ELISA，即酶聯免疫吸附實驗 ，其基本原理是将一定濃度的抗原或者抗體通過物理吸附的方法固定於(yú)聚苯乙烯微孔闆表面，加入待檢标本 ，通過酶标物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術作爲免疫标記技術（包含免疫熒光技術，免疫放射技術，免疫酶技術和免疫膠體金技術）中的一種 ，已廣泛應用於(yú)科研和臨床實驗中，具有快速，定性或者定量甚至定位的特點。值得注意的是，恒遠所銷售的ELISA試劑盒産(chǎn)品，僅用於(yú)科研實驗，不用於(yú)任何臨床診斷！下面就爲大家一一詳述ELISA實驗五大常用原理簡介。
雙抗體夾心法
雙抗體夾心法，其基本原理是将一定量的包被抗體以物理吸附的方法固定於聚苯乙烯微孔闆表面，加入無關蛋白載體封閉未結合位點，然後加入待檢标本 ，通過加入檢測抗體 ，酶标記第二抗體後用TMB底物顯色，微孔闆中顔色的深淺與待測物的濃度呈正相關。
該方法的适用條件是：含有多個抗原表位的大分子物質。因爲這種檢測(cè)方法需要兩種抗體，所以就涉及抗體配對的問題。一般而言，常用的抗體配對方法有一下幾種：包被抗體爲單抗，檢測(cè)抗體爲多抗；包被抗體爲單抗 ，檢測(cè)抗體爲單抗，但這兩種單抗針對的抗原表位不同；包被抗體爲多抗，檢測(cè)抗體爲多抗，這兩種多抗一般是來源於(yú)不同的宿主。
這種檢測(cè)方法在應用酶标第二抗體時，應該注意的一個原則是 ：第二抗體必須隻能針對檢測(cè)抗體，而不能針對包被抗體 。鑒於(yú)酶标二抗的局限性 ，現在一般廠家都引入生物素親和素放大系統，這種系統在提高反應靈敏度的同時 ，應用起來也更加方便，我們隻需要對檢測(cè)抗體進行生物素标記 ，不需要對每一種不同來源的二抗進行酶标記，隻需對親和素做HRP标記就可以省去很多繁瑣的工作 。
競争法
競争法一般分爲直接競争法和間接競争法，這裏我們以直接競争法爲例進行原理講解。直接競争法，其基本原理是：将合适濃度的包被抗體包被於微孔闆中，加入無關蛋白載體封閉未結合位點，加入标準品（樣本）和生物素标記的抗原物質進行競争結合，經合适的溫度和一定時間的孵育，洗滌後，加入HRP标記的鏈黴親和素進行反應，TMB顯色，微孔闆中顔色的深淺與待測物的濃度呈負相關。
該方法一般用來檢測具有較少表位的小分子物質，當然 ，這種方法也可以用來檢測大分子抗原物質甚至是抗體。檢測大分子抗原物質時，由於空間位阻的影響，使得該檢測方法沒有雙抗體夾心法檢測大分子抗原物質靈敏度高。這種方法在檢測抗體時，可能由於兩種競争的抗體來源不一，導緻兩種抗體趨同性不高，就使得檢測結果的可靠性不高。
間接法
間接法一般用來檢測抗體。其基本原理是：将一定量的抗原物包被於聚苯乙烯微孔闆，加入無關蛋白載體封閉未結合位點後 ，加入待測樣本，然後加入酶标二抗 ，經孵育和洗滌後，加底物顯色。一般而言 ，在間接法檢測抗體實驗中，由於酶标二抗的局限性，一般檢測的抗體爲總的IgG。
雙抗原夾心法
雙抗原夾心法，與雙抗體夾心法類似，基本原理是将已知濃度的抗原固定於聚苯乙烯微孔闆表面，對未結合位點用無關蛋白載體進行封閉後，加入待檢樣本，然後加入生物素标記的抗原和HRP标記的鏈黴親和素，經TMB顯色和終止反應，酶标儀讀數之後即可計算待測物濃度。雙抗原夾心法與間接法都可以對抗體進行檢測，但是前者檢測的是針對該抗原的所有種類的抗體，包含IgG, IgM, IgA，IgD, IgE，這是間接法做不到的。
捕獲法
捕獲法一般用來測定IgM類抗體。其基本原理是：将抗IgM抗體包被於固相微孔闆，用無關蛋白載體對未結合位點進行封閉後，加入待測樣本，接著加入抗原物質，然後加入針對該抗原的經生物素标記的特異性抗體和HRP标記的鏈黴親和素，經TMB底物顯色和終止反應後即可計算濃度。由於我們檢測樣本中的IgM含量時，其中同時含有較高濃度的IgG類抗體，在用一般的間接法檢測時，IgG類抗體和IgM類抗體會和固相抗原進行競争性結合，由於IgG占據優勢，勢必導緻IgM類抗體能夠結合上去的量相當有限，zui終導緻的結果是假陰性。
恒遠BIM品牌ELISA試劑盒在長期的銷售實踐中形成瞭(le)*的市場優勢，産品齊全 、價格合理 、經營穩健、信息反饋及時、並(bìng)能随時随地享受國外供應商直接、周到、完善的售後服務。作爲生物技術産品銷售的綜合性生命科學公司，本公司在免疫學、分子生物學和常規生化試劑方面表現的尤爲。想瞭(le)解更多精彩内容，歡迎前來咨詢！
點擊交流