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elisa常規指标實驗常見問題之白介素

  • 發布日期:2018-10-16      浏覽次數:2452
    •     elisa試劑盒在實際操作中,除瞭(le)選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作 ,同時作好室内質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份标本,才能保證檢測質量。現在國内已有相當數量的單位擁有全自動酶标儀,這對於(yú)實現elisa标準化檢測、提高檢測質量起到瞭(le)重要作用。

          白介素elisa試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到瞭(le)廣泛的應用,但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大,如不注意,有可能導緻顯色不全、花闆等結果。我将操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結於(yú)下,以期給同行帶來一些啓發 ,提高試驗質量。下面,分析白介素elisa試劑盒試驗操作中的一些常見問題:

      一、選擇試劑
      選擇質量優良的檢測試劑 ,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前将試劑在室溫下平衡30-60分鍾。

      二、加樣
      可能原因:
      1)血清或血漿标本分離不好即進行加樣; 
      2)手工操作中,加樣闆過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特别是室内溫度較高時); 
      3)加完标本再加酶試劑時酶濺出孔外。

      解決辦法:
      1) 标本爲血清:将血液先自然存放1-2小時後,再用3000rmp離心15分鍾;标本爲血漿:必須使用含抗凝劑的血液标本收集管 ,採血後必須立即颠倒採血管混合5-10次,放置一段時間後,3000rpm離心15分鍾;若在幾天内檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置於-20℃的低溫冰箱内。 
      2) 加樣後及時放入孵箱 。 
      3) 加酶試劑後用吸水紙在酶标闆表面輕拭吸幹。 
      4) 如果採用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑。 
      5) 标本較多時,請分批操作 。

      三、 孵育
      可能原因:
      1) 孵育時未貼封片或加蓋,使标本或稀釋液蒸發,吸附於孔壁,難於清洗*; 
      2) 孵育時間人爲延長,導緻非特異性結合緊附於反應孔周圍 ,難以清洗*。

      解決辦法:
      1) 貼封片或加蓋; 
      2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。

      四、洗闆
      ELISA試劑盒可能原因:
      1) 採用手工洗闆,孔與孔之間液體交叉。 
      2) 採用半自動洗闆機洗闆時,洗液量不足,導緻洗闆不*;洗闆針堵塞,抽吸不*;洗闆不暢,導緻洗闆效果差。 
      3) 反應闆過多造成洗闆等待時間長。

      解決辦法:
      1) 保證洗液注滿各孔,洗闆針暢通,洗完闆後在吸水紙(選擇幹淨、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍幹。 
      2) 合理安排,或多用幾台洗闆機。

      五、顯色
      可能原因:
      1) 顯色劑配制後放置時間過長或使用過期顯色劑; 
      2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

      解決辦法: 
      1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
      2) 加樣時保持顯色劑不外流 。 
      3) A、B液應避免接觸金屬器械。

      六、終止
      可能原因如加終止液時産生較多氣泡,導緻假陽性增加。所以在加終止液時應避免産生氣泡。

      七、讀闆
      如讀闆時闆底不清潔等。應保證酶标闆清潔。所以在整個操作過程中保證酶标闆不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測标準自動化,有效提高檢測質量。

          以上就是恒遠爲您解析的elisa白介素指标在實驗過程中遇到的常見問題的原因及解答,希望對您能有所幫(bāng)助,另外,上海恒遠ELISA試劑盒均經過嚴格交叉反應和幹擾測試及穩定性試驗,作爲一種分析檢測試劑,具有*反應模式,可滿足廣泛的檢測需求,新老客戶一緻認爲質量好,價格低,是同類産品中的的,公司擁有配置完善的售後服務和免費的技術支持,讓您無後顧之憂。想瞭(le)解更多精彩内容,請鎖定上海恒遠!