您現在的位置:首頁 > 技術文章 > 培養細胞專題:實驗小白變大神隻需要搞清楚這8個點

培養細胞專題:實驗小白變大神隻需要搞清楚這8個點

  • 發布日期:2019-12-03      浏覽次數:1800
    •     細胞培養實驗中用量多的就是細胞培養基,雖然細胞培養試驗基本技術大同小異,但是每種細胞的培養條件卻相差甚遠 。若偏離某種細胞所需的培養條件,則會導緻細胞表達不同的表型 。

          因此,在實驗前,需要熟悉自己所使用的細胞系 ,並在實驗中嚴格遵守所有産品的操作說明。 

          在實驗過程中,作爲實驗小白,我們應該如何應對相關問題呢?現在我們一起來看看!

          一、如何挑選适合自己細胞生長的培養基呢?

          選擇培養基沒有確切的标準,有幾點建議可供參考:

          1.建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞首xuan的培養基。可以查閱ATCC或在購買細胞株時咨詢供應商。

          2.根據細胞株的特點、實驗的需要來選擇培養基。如小鼠細胞株多選RPMI1640。

          3.其他實驗室慣用的培養基不妨一試,許多培養基可以适合多種細胞。

          4.也可用多種培養基培養細胞,觀察其生長狀态,可以用生長曲線、集落形成率等指标判斷,根據實驗室結果選擇*培養基,這是客觀的方法,但比較繁瑣。

          二、如何正確地保存培養基?

          普通的培養基放置在2-8℃冰箱避光保存,若已開封建議3周内使用。未開封的培養基,一般可穩定保存1年。

          三、培養基中酚紅的作用是什麽?導緻培養基顔色變化的原因有哪些?

          酚紅在培養基中被用來作爲pH值的指示劑:中性時爲紅色,酸性時爲黃色,堿性時爲紫色。

          1.培養基顔色變黃,原因有:培養基中細胞代謝産物爲酸性,培養瓶受污染 ,細菌代謝産酸等導緻。

          2.培養基顔色偏暗紅色 ,原因有:培養基保存在4℃冰箱中,培養基内的二氧化碳逐漸溢出,造成培養基越來越偏堿性,而培養基中的酸堿指示劑酚紅會随著堿性增加而更偏暗紅 。

          四、我感覺自己的培養基污染瞭,這要怎麽進行測試呢?

          取0.1ml液體培養基塗布到無菌蛋白凍niu肉膏培養基上37℃培養24h,觀察有無雜菌生長(肉眼即可觀察到)。

          五、如果我的培養基中添加瞭血清和抗生素後,可長期保存嗎?

          一旦培養基中添加瞭血清和抗生素,建議避光保存在4℃冰箱且在2周内用完。因爲一些抗生素和血清的基本成分在解凍後就開始降解瞭。

          六、培養基怎麽有沉澱瞭,這是怎麽回事?怎麽預防處理沉澱?

          1.首先判斷培養基是否已經污染,其次,若沉澱爲絮狀沉澱則可能是加入血清引起的,此沉澱對細胞培養無影響。若沉澱爲結晶,有可能是因爲向培養基裏加入的輔助試劑降低瞭培養基的溶解度,使一些無機鹽析出。

          2.可應用離心、過濾的方法去除這些沉澱,盡可能地減少血清凍融次數。

          七、那我什麽情況下可以使用不加酚紅的培養基呢?

          研究表明,酚紅可以模拟固醇類激素(特别是雌激素)的作用。爲避免固醇類反應,培養細胞時,用不加酚紅的培養基;一些研究人員在做流式細胞檢測時,爲瞭避免酚紅幹擾檢測,也使用不加酚紅的培養基。

          八、爲什麽培養基中會含有L-谷氨酰胺和丙酮酸鈉,它們的作用是什麽?

          L-谷氨酰胺脫掉氨基後可作爲培養細胞的能量來源參與蛋白質的合成和核酸代謝。丙酮酸鈉可以作爲細胞培養中的替代碳源。盡管細胞更傾向於以葡萄糖作爲碳源,但是如果沒有葡萄糖的話,細胞也可以代謝丙酮酸鈉。