常規用於(yú)ELISA實驗的樣本包含血清、血漿、細胞培養上清、尿液以及組織勻漿等。不同樣本類型的預處理方法存在差異，合适的樣本預處理是確(què)保ELISA實驗正確(què)性和準確(què)性的first步。這裏，我們将介紹幾種不同樣本類型的處理方法。
一、血清
血清是ELISA實驗常用的樣本，其預處理也十分簡單。
使用無熱原無内毒素的試管或離心管採(cǎi)集血液樣本，将試管或離心管在室溫下放置2小時或4℃過夜 ，分離出血清（建議傾斜試管或離心管以擴大液面的橫截面，使血清可以更大程度地分離出來）。2-8℃下以1000×g離心20分鍾，小心收集上清液（血清），立即進行測(cè)定。建議在-20℃或-80℃下将收集的血清分裝保存 ，避免反複凍融 。
在收集血液樣本的過程中應避免溶血，因爲紅細胞在溶解時會釋放具有過氧化物酶活性的物質，這種情況下，ELISA實驗中将會出現非特異性顯色反應，導緻檢測(cè)結果不準確(què)。另外 ，樣本還應避免細菌污染，因爲細菌可能含有内源性HRP，也會導緻檢測(cè)結果不準確(què)。
二、血漿
使用含抗凝劑的採血管或離心管採集血液樣本，採集後30分鍾内，2-8℃下以1000×g離心15分鍾，小心收集上清液（血漿）。建議在-20℃或-80℃下将收集的血漿分裝保存，避免反複凍融。樣本應避免溶血或高血脂。常見的抗凝劑包括EDTA鈉鹽，肝素鈉，枸橼酸鈉等 。檢測前請仔細閱讀ELISA試劑盒說明書 ，查看該試劑盒針對抗凝劑是否有特殊要求。
三 、細胞培養上清
将細胞培養上清液吸入離心管中 ，在2-8℃下以1000×g離心20分鍾，除去細胞碎片和雜質 ，收集上清液備用，樣本保存在-20℃或-80℃，避免反複凍融。
四 、細胞提取液
反複凍融方法
1.吸出培養闆中的培養基，用胰蛋白酶消化細胞，然後加入适量的培養基将培養闆上的細胞沖洗幹淨。懸浮細胞可以省略該步驟。
2.将細胞懸浮液收集到離心管中 ，在2-8℃下以1000×g離心5分鍾，然後吸去培養基 ，用預冷PBS洗滌細胞3次 。
3.加入适量的預冷PBS（建議在使用前立即加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。在6孔培養闆（約1×106個細胞）中，每個孔加入150-250μL的PBS來重懸細胞。
4.使樣本在-20℃或-80℃條件和室溫條件下反複凍融，重複凍融過程數次 ，直至細胞*裂解。也可以使用超聲波細胞破碎器超聲處理懸浮液來裂解細胞 。
5.2-8℃下以1500×g離心10分鍾 ，去除細胞碎片，收集上清液，-20℃或-80℃保存，避免反複凍融。
五、組織勻漿
1.用預冷的PBS（0.01M，PH7.4）沖洗組織以除去表面殘留的血液或雜質（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果）。
2.将組織塊稱重，然後切成盡可能小的碎塊，以便充分勻漿。
3.加入适量的預冷PBS（一般按1:9的重量體積比 ，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要适當調整，並做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑），用玻璃勻漿器在冰上或冰浴中充分勻漿。爲瞭進一步裂解組織細胞 ，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反複凍融。
4.将勻漿液吸入離心管中，2-8℃下以5000×g離心5分鍾，收集上清液，保存至-20℃或-80℃，避免反複凍融。
六、唾液
在2-8℃下，4000×g離心10分鍾以去除雜質，取上清即可檢測。建議使用新鮮的唾液樣本檢測。
七、尿液
使用無菌容器收集尿液樣本。在2-8℃下，1000×g離心15分鍾以去除雜質，取上清即可檢測。
八、糞便
将糞便樣本用PBS(0.01M, pH=7.4)重懸,置於冰上振蕩15分鍾,然後在2-8℃，5000×g離心5分鍾 ，取上清即可檢測。
九、其他生物體液
請咨詢技術支持。
樣品注意事項
1.樣品收集後若在1周内進行檢測的可保存於4℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存於-20℃(1個月内檢測)，或-80℃(3個月内檢測)，避免反複凍融。融化樣本在試驗前請再次離心以去除凍融後可能出現的沉澱物。
2.試劑盒檢測(cè)範圍不等同於(yú)樣本的濃度範圍，如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高於(yú)标準品Max值，請根據實際情況，做适當倍數稀釋(建議查閱文獻後先做預實驗，以確定稀釋倍數)。
3.若所檢(jiǎn)樣本不在說明書所列樣本之中，建議做預實驗驗證其檢(jiǎn)測(cè)有效性。
4.若使用化學裂解液制備(bèi)組織勻漿或細胞提取液，由於(yú)引入某些化學物質會導緻ELISA測值出現偏差。樣本中不能含有會抑制HRP活性的NaN3，否則會造成假陰性結果。
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