ELISA試劑盒标本處(chù)理複雜多樣，一不小心沒處(chù)理好可能會導(dǎo)緻實驗的數據偏差。那到底怎麽處(chù)理才算是比較合理的呢？恒遠生物爲您總結一份ELISA實驗标本處(chù)理攻略，請收好啦!
一、血清的採(cǎi)集 、處(chù)理和保存
1.真空採(cǎi)血針採(cǎi)集2ml 新鮮血液 ，加入無菌試(shì)管中。
2.採(cǎi)血後(hòu)室溫靜置1小時。
3.将採(cǎi)集血液用離心機4℃，2500rpm離心10min，将離心好的勻漿留上清，棄下面沉澱(diàn)。
4.取上清。分裝凍(dòng)存備(bèi)用，2-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下，可放置保存1個月；-70℃下 ，可放置保存6個月 。
5.根據您的實驗需要，取适量上清夜進行各種ELISA測(cè)定 。大部分ELISA檢測(cè)均以血清爲标本。血清标本可按常規方法採(cǎi)集 ，應注意避免溶血，紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質，以HRP爲标記的ELISA測(cè)定中 ，溶血标本可能會增加非特異性顯色 。此外還應避免細菌污染，因爲菌體中可能含有含有内源性過氧化物酶 ，也會産生假陽性反應。血清标本宜在新鮮時檢測(cè)。如在冰箱中保存過久，其中的可發生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。
二、血漿的採(cǎi)集、處(chù)理和保存
1.真空採(cǎi)血針採(cǎi)集2ml新鮮血液，加入無菌試(shì)管中 。
2.按1:9加入抗凝劑（EDTA、草酸鈉、肝素），30分鍾内於(yú)冰上分離血漿以減少血小闆的污染；（也可以直接用抗凝管採(cǎi)集）。
3.将採(cǎi)集血液用離心機4℃，2500rpm離心5 min，将離心好的勻漿留上清 ，棄下面沉澱(diàn) 。
4.取上清。分裝凍(dòng)存備(bèi)用，2-8℃下 ，可放置保存24-48小時；-20℃下 ，可放置保存1個月；-70℃下，可放置保存6個月。
5.根據您的實驗需要，取适量上清夜進行各種ELISA測定。請注意指标說明書上對於(yú)抗凝血劑是否有特殊要求，建議使用 EDTA。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等於(yú)血清。注意事項 ：制備(bèi)血漿标本需借助於(yú)抗凝劑EDTA, 抗凝的标本因纖維蛋白原幹擾而造成假陽性 。
三、尿液的採(cǎi)集 、處(chù)理和保存
1.採(cǎi)集尿液樣本500ul加入無菌試(shì)管中。
2.将採(cǎi)集血液用離心機4℃，2500rpm離心10 min，将離心好的樣本留上清，棄下面沉澱(diàn)。
3.取上清。分裝凍(dòng)存備(bèi)用，2-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下 ，可放置保存 1 個月；-70℃下，可放置保存6個月。
4.根據(jù)您的實驗需要，取适量上清夜進行各種ELISA測(cè)定。
四 、細胞上清液的採(cǎi)集、處(chù)理和保存
1.採(cǎi)集細胞培養上清液500ul，加入無菌試(shì)管中 。
2.将採(cǎi)集血液用離心機 4℃，2500rpm 離心 10 min，将離心好的勻漿留上清 ，棄下面沉澱(diàn)。
3、取上清 。分裝凍(dòng)存備(bèi)用，2-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下 ，可放置保存1個月；-70℃下，可放置保存6個月 。
4.根據(jù)您的實驗需要 ，取适量上清夜進行各種ELISA測(cè)定。
五、各類組織勻漿的採(cǎi)集 、處(chù)理和保存
1.採(cǎi)集組織，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液 ，濾紙拭幹 ，稱(chēng)重 ，剔除附屬的結締組 織 ，稱(chēng)取組織塊。
2.用移液管量取0.1M PBS或者用0.86％冷生理鹽水 ，勻漿介質或生理鹽水的體積(jī)總量應 該(gāi)是組織塊重量的9倍，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時操作要在冰水浴中進行，将盛有組織的小燒杯放入冰水中）。
3.勻(yún)漿(jiāng)的方式有多種：
a) 手工勻漿：将剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再将剩餘的1/3勻漿介質或生理鹽水沖(chōng)洗殘(cán)留在燒杯中的碎組織塊 ，一起倒入勻漿管中進行勻漿，左手持勻漿管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将搗杆垂直插入套管中，上下轉動研磨數十次（6～8分鍾），充分研碎，使組織勻漿化。
b) 機器勻漿 ：用組織搗碎機 10000～15000r/min 上下研磨制成10％組織勻漿，也可用 内切式組織勻漿機制備(bèi)（勻漿時間10秒/次，間隙30秒，連續3～5 次，在冰水中進行），皮膚、肌肉組織等可延長(zhǎng)勻漿時間。
4.将制備(bèi)好的10％勻漿用離心機4℃，3000rpm離心15min，将離心好的勻漿留上清，棄下面沉澱(diàn)。
5.取上清。分裝凍(dòng)存備(bèi)用，2-8℃下，可放置保存24-48小時；-20℃下，可放置保存1個月；-70℃下，可放置保存6個月。
6.根據(jù)您的實驗需要，取适量上清夜進行各種ELISA測(cè)定。
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