小鼠白細胞介素17（IL-17）試劑(jì)盒實(shí)驗原理及操作步驟

 　　　小鼠白細胞介素17（IL-17）試劑(jì)盒實(shí)驗原理及操作步驟

 

本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍：                                                          96T
3pg/ml-120pg/ml
 
使用目的：
小鼠白細胞介素17（IL-17）試(shì)劑(jì)盒用於測定小鼠血清、血漿(jiāng)及相關(guān)液體樣本中白細胞介素-17（IL-17）含量。
小鼠白細胞介素17（IL-17）試(shì)劑(jì)盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中小鼠白細胞介素-17（IL-17）水平
。用純化的小鼠白細胞介素-17（IL-17）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素-17（IL-17），再與HRP标記的白細胞介素-17（IL-17）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色
。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的白細胞介素-17（IL-17）呈正相關
。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中小鼠白細胞介素-17（IL-17）濃度。
小鼠白細胞介素17（IL-17）試(shì)劑(jì)盒操作步驟
1.         标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120pg/ml	5号标準品	150μl的原倍标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
60pg/ml	4号标準品	150μl的5号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
30pg/ml	3号标準品	150μl的4号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
15pg/ml	2号标準品	150μl的3号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
7.5pg/ml	1号标準品	150μl的2号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
 
 
2.         加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.         溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。  
4.         配液：将20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用
5.         洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次
，拍幹。
6.         加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外
。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.     測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。