實驗時ELISA競争法檢測抗-HBe

    ELISA方法學在實驗中運用的很廣泛，5個實驗3個實驗都是用ELISA法檢測的，對於ELISA實驗中也是有多種方法學可以選擇的，今天我們著(zhe)重的講解下ELISA實驗中競争法檢測抗-HBe，先來瞭(le)解一下實驗原理吧！




    一、實(shí)驗(yàn)原理

    用抗-HBe包被固相載體後(hòu)，同時加被檢血清和合适滴度中和試劑(jì)HBeAg，若被檢血清中含有抗-HBe，則與包被抗-HBe競争結合HBeAg，被檢标本中抗-HBe越多，HBeAg被結合越多，而與包被抗-HBe結合就越少，加底物後(hòu)顯色就越淺；反之越深。

 

    二、主要試(shì)劑(jì)與器材

    ELISA試劑盒
：内含已包被抗-HBe闆條、HRP-抗HBe溶液、中和試劑HBeAg溶液、陽性和陰性對(duì)照血清，底物溶液（A液、B液）、終止液、洗滌(dí)液。




    三、結(jié)果分析

    1.P/N≤0.3爲(wèi)陽(yáng)性。P/N＞0.3爲(wèi)陰性。

    2.P/N=待檢(jiǎn)血清OD值/陰性對(duì)照OD值。




    四、注意事項(xiàng)

    1.試劑置2-4℃保存。取用時應先置室溫平衡。幹(gàn)包被闆條須密封防潮，凍(dòng)存，取用後餘者及時封存。

    2.恰當(dāng)選好HBeAg的濃(nóng)度。

    3.試(shì)劑(jì)用前應搖勻。




    五、操作步驟(zhòu)

    1.加樣：取出幹包闆條，按編(biān)号順序分别加50μl待檢血清、陰性對照血清和陽性對照血清於(yú)相應孔中。設空白對照孔，除此孔外，每孔加HBeAg50μl、HRP-抗HBe50μl，振蕩混勻後，置43℃（或37℃）溫育1h。

    2.洗滌(dí)：甩去孔内液體，用洗滌(dí)液注滿各孔，靜置20s，甩幹。如此重複(fù)洗滌(dí)4次，在吸水紙上拍幹。

    3.顯色：每孔加顯色劑A、顯色劑B各50μl，振蕩(dàng)混勻後(hòu)置37℃避光顯色10-15min。

    4.終止：每孔加終止液50μl，振蕩(dàng)混勻(yún)。

    5.酶标儀檢測(cè)：選用450nm波長(zhǎng)，用空白孔調零之後測(cè)各孔OD值。




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