人白細胞介素1β試(shì)劑(jì)盒操作步驟
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍： 96T
1pg/ml-40pg/ml
使用目的：
實驗原理
人白細胞介素1β試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中人白細胞介素1β（IL-1β）水平。用純化的人白細胞介素1β（IL-1β）抗體包被微孔闆 ，制成固相抗體 ，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素1β（IL-1β），再與HRP标記的白細胞介素1β（IL-1β）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色 ，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色 。顔色的深淺和樣品中的白細胞介素1β（IL-1β）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中人白細胞介素1β（IL-1β）濃度 。
1. 标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋 。
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40pg/ml
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5号标準品
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150μl的原倍标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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20pg/ml
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4号标準品
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150μl的5号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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10pg/ml
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3号标準品
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150μl的4号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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5pg/ml
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2号标準品
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150μl的3号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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2.5pg/ml
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1号标準品
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150μl的2号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
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2. 加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑 ，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻 。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌 ：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液 ，靜置30秒後棄去 ，如此重複5次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
保存條件及有效期
2．有效期：6個月
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