人白介素ELISA試劑盒採(cǎi)用雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測技術 。特異性抗人 IL-1α 單克隆抗體預包被在高 親和力的酶标闆上 。酶标闆孔中加入标準品、待測樣本和檢測抗體，經過孵育 ，樣本中存在的IL-1α與固相抗體和檢測抗體結合 。洗滌去除未結合的物質後，加入辣根過氧化物酶标記的鏈黴親和素(streptavidin-HRP)。洗滌後，加入顯色底物TMB，避光顯色。顔色反應的深淺與樣本中IL-1α的濃度成正比。加入終止液終止反應 ，在 450 nm 波長(參(cān)考波長 570 - 630 nm)測定吸 光度值 。
人白介素ELISA試劑(jì)盒标本保存會(huì)遇到哪些問題呢 ，一起來看看吧！
一、标本保存不當
在冰箱中保存過久的标本，血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體，在間接法ELISA測定中會導緻本底過深、甚至造成假陽性；标本放置時間過長（如一天以上），有時抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現假陰性。爲克服上述幹擾，ELISA測定的血清标本宜爲新鮮採(cǎi)集；如不能立即測定 ，5天内測定的血清标本可存放於(yú)4℃，1周後測定的血清标本應低溫凍存；凍存後融解的标本，蛋白質局部濃縮，分布不均 ，應充分混合後再測定，但混勻時應輕柔，不可強烈振蕩。
二、标本溶血
由於(yú)各種人爲原因引起的标本溶血 ，均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白 ，在以辣根過氧化物酶爲标記的ELISA測定中，會導緻非特異性顯色，ELISA試劑盒幹擾測定結果。爲克服上述幹擾作用，标本採(cǎi)集時必須注意避免溶血。
三、标本凝集不全
在沒有促凝劑和抗凝劑存在的情況下，正常血液採集後1/2~2h開始凝固，18~24h凝固 。臨床檢驗工作中，有時爲瞭(le)争取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，此時的血清中仍殘留部分纖維蛋白原 ，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；這類情況於(yú)次日複查時因已血凝 ，血清中不再有纖維蛋白原存在，故複查結果變爲陰性。爲避免上述幹擾作用，解決的辦法是血液标本採集後必須使其充分凝固後再分離血清，或标本採集時用帶分離膠的採血管或於(yú)採血管中加入适當的促凝劑。
四、标本管中添加物質(zhì)的影響(xiǎng)
抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對(duì)ELISA測(cè)定有一定幹擾作用。
五、标本受細菌污染
因菌體中可能含有内源性辣根過氧化物酶，因此，被細菌污染的标本同溶血标本一樣，亦可産(chǎn)生非特異性顯色而幹擾測(cè)定結果。
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