血清:指血液凝固後,在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。主要作用是提供基本營養物質、提供激素和各種生長(zhǎng)因子、提供結合蛋白、提供促接觸(chù)和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞的起到某些保護作用。
用於(yú)細胞培養的胎牛血清以及其它血清中可能存在的沉澱(diàn)物有以下三種:
1.纖維蛋白:它是經常出現的較大的沉澱物,可以達到1-2mm,肉眼可觀。因爲血清都是在低溫下進行收集和快速處(chù)理的,一些纖維蛋白原(可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體)在處(chù)理過程中仍然處(chù)於(yú)溶解狀态,當經過過濾分裝後,就會在瓶中凝結出現纖維蛋白沉澱。
2.膽(dǎn)固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質。他們也是血清中出現沉澱(diàn)物的常見原因。
3.磷酸鈣:也是常見的一種沉澱物,通常會使血清出現渾濁的現象,並(bìng)且在37℃培養的時候會增加。這種沉澱物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點,這些小黑點由於(yú)布朗運動看上去可以活動,因此經常被誤認爲是微生物污染。
影響:
1.血清中出現大量的沉澱物,血清将很難過濾。一般說來,在血清生産後已經經過100nm或者40nm的過濾處理,並(bìng)經過嚴格的無菌檢測,因此不推薦再次過濾用於(yú)細胞培養的血清。可以在大規模的細胞培養中将血清直接加到培養基中一起過濾。
3、污染,磷酸鈣往往被誤認爲是微生物污染,研究者可能會在血清中觀察到一些絮狀的沉澱,就會去做無菌試驗,将血清放在培養箱中培養幾天,結果可能會觀察到更多的絮狀沉澱,因此就斷定血清被污染瞭(le)。我們建議不要直接将血清放在培養箱中培養觀察是否有菌,而是将血清加到瓊脂闆上進行培養以觀察是否有細菌生長。另外,也可以進行革蘭氏染色,在油鏡下觀察,以確(què)認是否有污染。
避免血清沉積發(fā)作的辦(bàn)法:
a)凍(dòng)結血清時,請随時将之搖晃均勻,使溫度及成分均一,削減沉積的發(fā)作。
b)血清分裝凍(dòng)存時,須規矩搖晃均勻(當(dāng)心勿形成氣泡),使溫度與成分均一。
c)勿直接由-20℃直接至37℃凍結,因溫度改變(biàn)太大,簡單(dān)形成蛋白質凝結而發作沉積。
d)勿将血清置於(yú)37℃太久,不然血清會變(biàn)得污濁,一起血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞,然後影響血清的質量。
e)血清的熱滅活十分簡單(dān)形成沉積物的增多,若非必要,能夠(gòu)無須做此過程。
f)若有必要做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鍾的準則,而且随時搖晃均勻,溫度過(guò)高,時刻過(guò)久或搖晃不均勻,都會(huì)形成沉積物的增多。