一、原代細(xì)胞培養(yǎng)的應用
1.爲研究生物體(tǐ)細胞的生長(zhǎng)、代謝、繁殖提供有力的手段;
2.爲傳代培養創造條件;
3.服務於(yú)臨床實踐(jiàn),用於(yú)藥物篩選等。
二、原代細(xì)胞培養的分離(lí)注意事項
1、組織塊培養法
1)組織塊接種後的前3天,在觀察和移動的過程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經常翻動和振動,否則組織塊不易附著(zhe)於(yú)瓶壁上或附著(zhe)後也會脫落飄起。
2)加入的培養液不宜過(guò)多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來。
3)當細胞向外遷徙出來後要注意記錄並(bìng)去除漂浮的組織塊和殘(cán)留的細胞,它們産生的有毒物質會影響原代細胞的生長。
4)爲促進組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上,可以在種植前先将膠(jiāo)原薄層(céng)塗在培養瓶底壁上。
2、貼壁型原代細胞
1)原代培養的分離細胞在初次接觸體外環境時,它們之間會互相影響,在這些細胞之間能産(chǎn)生一些促生長的活性物質,使細胞彼此互相促進存活和生長。如果接種的細胞密度過低,細胞之間的促生長作用很小,也很難使細胞适應從體内的組織環境到被分散後進入獨立生存環境的變(biàn)化過程。如果接種的細胞密度過大,會導緻營養物質供應不足,代謝廢物積累較快需要經常換液和傳代。
2)适當增大原代培養接種的細胞密度,給培養的細胞提供更多類似於(yú)在體内時細胞之間的相互作用,會極大提高原代培養的細胞在體外存活率。待細胞适應體外環境後進行傳(chuán)代培養時再以較低的密度接種和培養。
3)盡快使接種的細胞貼壁,是決定培養能否成功的關(guān)鍵。可以在接種後先将培養瓶置培養箱内培養3小時到5小時,待細胞貼壁後,再補(bǔ)足培養液繼續培養。
3、懸浮型原代細胞
1)必須保持細胞的懸浮狀态,可以通過增加培養液的黏度來幫(bāng)助細胞呈懸浮狀态,如給培養液中加入低濃度的透明質酸複合物。在有攪拌裝置的培養器皿内加入培養液,以5ml爲zui低限度,否則攪拌時會産生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快,否則即可使培養液溢出又容易造成污染。如果培養液的量在5ml以下,可以採(cǎi)用旋轉瓶培養,給懸浮培養的細胞換液時要注意不要吸出細胞。
2)能夠(gòu)進行懸浮培養的細胞,其生命力一般都比較旺盛,體外分裂增殖的速度較快,營養成分消耗大,換(huàn)液時間隔一般較短。