檢測範圍： 96T
0-20μg/L
使用目的：
本試劑盒用於測定大鼠血清、血漿(jiāng)及相關(guān)液體樣本中Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）含量。
實驗原理
大鼠Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）試劑盒應用雙抗體夾(jiā)心法測(cè)定标本中大鼠Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）水平。用純化的大鼠Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）抗體包被微孔闆 ，制成固相抗體 ，往包被單抗的微孔中依次加入Ⅲ型膠原（Col Ⅲ），再與HRP标記的Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物，經過*洗滌(dí)後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）呈正相關 。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過(guò)标準曲線計(jì)算樣品中大鼠Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）濃度。
試劑盒組成
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1 |
30倍濃縮洗滌液 |
20ml×1瓶 |
7 |
終止液 |
6ml×1瓶 |
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2 |
酶标試劑 |
6ml×1瓶 |
8 |
标準品（40μg/L） |
0.5ml×1瓶 |
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3 |
酶标包被闆 |
12孔×8條 |
9 |
标準品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
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4 |
樣品稀釋液 |
6ml×1瓶 |
10 |
說明書 |
1份 |
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5 |
顯色劑A液 |
6ml×1瓶 |
11 |
封闆膜 |
2張 |
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6 |
顯色劑B液 |
6ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1個 |
标本要求
1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗 。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢(jiǎn)測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
1. 标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀釋 。
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20μg/L |
5号标準品 |
150μl的原倍标準品加入150μl标準品稀釋液 |
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10μg/L |
4号标準品 |
150μl的5号标準品加入150μl标準品稀釋液 |
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5μg/L |
3号标準品 |
150μl的4号标準品加入150μl标準品稀釋液 |
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2.5μg/L |
2号标準品 |
150μl的3号标準品加入150μl标準品稀釋液 |
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1.25μg/L |
1号标準品 |
150μl的2号标準品加入150μl标準品稀釋液 |
2. 加樣：分别設空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì) ，其餘各步操作相同）、标準孔、待測(cè)樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋(shì)液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫(wēn)育：用封闆膜封闆後(hòu)置37℃溫育30分鍾。
4. 配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
5. 洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜 ，棄去液體 ，甩幹(gàn) ，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置30秒後棄去，如此重複5次 ，拍幹。
6. 加酶 ：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯(xiǎn)色：每孔先加入顯(xiǎn)色劑(jì)A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍(lán)色立轉黃(huáng)色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
大鼠Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）試劑盒注意事項1．試劑盒從(cóng)冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開(kāi)封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌(dí)液可能會(huì)有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(dí)時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鍾内，如标本數量多，推薦(jiàn)使用排槍(qiāng)加樣 。
4． 請每次測(cè)定的同時做标準曲線，做複(fù)孔。如标本中待測(cè)物質含量過高（樣本OD值大於标準品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋(shì)液稀釋(shì)一定倍數（n倍）後(hòu)再測(cè)定，計算時請zui後(hòu)乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。
9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)爲準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
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