檢測(cè)範(fàn)圍：2.5pg/ml-85pg/ml
使用目的：
本試劑盒用於(yú)測(cè)定人血清 、血漿及相關液體樣本中信号傳導子及轉錄激活子5B(STAT5B)含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中人信号傳導子及轉錄激活子5B(STAT5B)水平。用純化的人信号傳導子及轉錄激活子5B(STAT5B)抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入信号傳導子及轉錄激活子5B(STAT5B)，再與HRP标記的信号傳導子及轉錄激活子5B(STAT5B)抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過徹-底洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色 ，並(bìng)在酸的作用下轉化成最終的黃色 。顔色的深淺和樣品中的信号傳導子及轉錄激活子5B(STAT5B)呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測(cè)定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中人信号傳導子及轉錄激活子5B(STAT5B)濃度。
标本要求 ：
1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行 ，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於(yú)-20℃保存，但應避免反複凍融。
2．不能檢測(cè)含NaN3的樣品 ，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性 。
操作步驟：
1.标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支 ，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80pg/ml5号标準(zhǔn)品150μl的原倍标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
40pg/ml4号标準(zhǔn)品150μl的5号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
20pg/ml3号标準(zhǔn)品150μl的4号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
10pg/ml2号标準(zhǔn)品150μl的3号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
5pg/ml1号标準(zhǔn)品150μl的2号标準(zhǔn)品加入150μl标準(zhǔn)品稀釋(shì)液
2.加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻。
3.溫(wēn)育：用封闆膜封闆後(hòu)置37℃溫(wēn)育30分鍾。
4.配液：将30倍（48T的20倍）濃縮洗滌(dí)液用蒸餾水30倍（48T的20倍）稀釋後備(bèi)用。
5.洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置30秒後棄去，如此重複(fù)5次，拍幹。
6.加酶：每孔加入酶标試(shì)劑(jì)50μl，空白孔除外 。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑(jì)A50μl，再加入顯色劑(jì)B50μl，輕輕震蕩(dàng)混勻，37℃避光顯色10分鍾 。
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍(lán)色立轉黃(huáng)色）。
測(cè)定：以空白孔調零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應在加終止液後15分鍾以内進行。
完整版說明書可咨詢我司業務員。上海恒遠生物科技有限公司專業供應高品質人ELISA試劑盒 、大鼠ELISA試劑盒、小鼠ELISA試劑盒、豚鼠ELISA試劑盒、兔ELISA試劑盒、牛ELISA試劑盒等各種ELISA試劑盒及生物試劑、培養基、标準品、對(duì)照品、血清等試驗耗材！如果您有實驗上的問題歡(huān)迎來咨詢。
點擊交流