大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測範圍： 96T
10U/L -320 U/L
使用目的 ：
本試劑盒用於測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶
（NAG）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）水
平。用純化的大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，
往包被單抗的微孔中依次加入 NAG，再與 HRP 标記的 NAG 抗體結合，形成抗體-抗原-酶
标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB 顯色 。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，
並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的 NAG 呈正相關 。用酶标儀在
450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過标準曲線計算樣品中大鼠 N-乙酰-β-D-氨基葡萄
糖苷酶（NAG）濃度。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶标試劑 6ml×1瓶 8 标準品（640 U/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被闆 12 孔×8條 9 标準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1瓶 11 封闆膜 2 張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
标本要求
1．标本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行 ，提取後應盡快進行實驗 。若不能
馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品 ，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性 。
操作步驟
1. 标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
320U/L 5 号标準品 150µl的原倍标準品加入150µl标準品稀釋液
160 U/L 4 号标準品 150µl的5 号标準品加入150µl标準品稀釋液
80 U/L 3 号标準品 150µl的4 号标準品加入150µl标準品稀釋液
40 U/L 2 号标準品 150µl的3 号标準品加入150µl标準品稀釋液
20 U/L 1 号标準品 150µl的2 号标準品加入150µl标準品稀釋液
2. 加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同） 、标準孔、
待測樣品孔。 在酶标包被闆上标準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，
然後再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻 。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液 ：将30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此
重複 5次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色
15 分鍾.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應在加終止
液後 15分鍾以内進行。
大鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用，酶标包被闆開封後如未
用完 ，闆條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶 ，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大於标準品孔*孔的OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計
算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5） 。
5． 封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書爲準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6個月
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