ELISA作爲經典的免疫檢測方法，看起來很平常，然而真正做好它並(bìng)不容易。恒遠專注科研試劑盒的研發及銷售多年，涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域，滿足您實驗所需，以實現與客戶的雙赢，完善的庫存及供應體系以及高效穩定的專業技術，保證産品均能現貨供應。有哪些方法可以借鑒呢？恒遠技術人員總結瞭(le)以下幾點：
一、確(què)定您的樣本類型和試劑(jì)盒可以兼容
常見樣本類型有血清 ，血漿 ，細胞培養上清，如果是廠(chǎng)家實驗驗證過的 ，可根據産(chǎn)品說明購買使用 。
注意 ：血漿制備(bèi)用到的抗凝劑有 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等多種 ，相應的血漿性質存在差異，需單獨確(què)認兼容性
二、試劑盒檢測(cè)範(fàn)圍需要匹配樣本中标志物濃度
elisa試劑盒的定量檢測範圍需參(cān)考标準曲線，在标準曲線低和最高濃度區間内屬於(yú)線性範圍，其中的值是可信和可定量的。濃度高於(yú)線性範圍的樣品要稀釋到線性範圍内來測量，而濃度低於(yú)線性範圍的樣品，其測量值不能用於(yú)計算濃度 ，隻能用做參(cān)考。有一種常見的相關情況是：健康人樣本中很多标志物的濃度偏低 ，測量值低於(yú)标準曲線低值 。
三、樣(yàng)本收集有講(jiǎng)究
以血清爲例，樣本收集可參(cān)考試劑盒說明書，但需注意以下要點 。樣本盡量用無菌管收集，避免細菌的酶類和代謝産品對結果的影響。採(cǎi)集過程要避免溶血，因爲紅細胞溶解釋放的活性物質可能會影響檢測 。保存過程中如有沉澱，應離心後取上清液。樣本若不立即測定，建議按照每次使用量分裝保存在 -20℃，每次檢測使用一管，即避免交叉污染和反複凍融，有能保證檢測結果的平行可比性。
四、實驗前要準備(bèi)好相應試劑(jì)
提前将所有試劑平衡到室溫環境 ，這個過程大緻需半小時左右。洗液是濃縮液，如有結晶析出，需溶解後再進行稀釋 。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鍾按 1:1 配成混合液。爲保證蛋白标準品溶液配制質量 ，蛋白标準品爲凍幹粉 ，重溶前需将管子離心，加入說明書的緩沖(chōng)液，慢速在搖床上搖勻或颠倒混勻，至少 15 分鍾，不建議用槍頭吹打。溶解後如需保存，按每次使用量分裝後根據說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白标準品時，建議用聚丙烯管（對蛋白吸附力很低），每步都要充分混勻且更換新槍頭，確(què)保梯度準確(què)性。
五、儀器設(shè)備(bèi)的準備(bèi)
相關設備包括移液器、洗闆機/搖床和酶标儀。移液器的準確性對於(yú)ELISA實驗結果的可靠性十分關鍵，需要確保定期校準維護。搖床的使用是爲瞭(le)讓反應體系快速達到平衡，獲得穩定、可重複的結果。不用搖床對實驗通常的影響是，OD 值低，CV 大。酶标儀等設備使用前提前15分鍾開機預熱。
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