先把蛋白稀釋一定的倍數 ，比如說10倍、20倍稀釋（這樣可以大體確(què)定一個參數），将抗原進行一系列稀釋包被微量反應闆 ，再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進行孵育後洗滌 ，再加酶結合物進行反應 ，經孵育洗滌後 ，加底物溶液顯色，終止反應後分别測定o.d值，選擇o.d值≥1.0的那個抗原稀釋度爲zui适包被濃度。一般總是要選擇那個o.d值稍大於(yú)1.0，而不選擇小於(yú)1.0的抗原濃度 。陰性參考血清o.d值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的o.d值有明顯差别。
在ELISA試劑(jì)盒實驗血清爲什麽要稀釋？有兩個(gè)原因：
1.競(jìng)争抑制比較(jiào)明顯，應稀釋競(jìng)争物；
2.血清中含有的性腺激素比較低 ，應該(gāi)濃縮才對(duì)。
ELISA試劑盒血清标本的保存建議有以下幾(jǐ)點(diǎn)：
1.樣本的採(cǎi)集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白産生分解作用；二則一些細菌的内源性酶如大腸杆菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作标記的測(cè)定方法産生非特異性幹擾 。
2.血清标本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，ELISA如爲有菌操作 ，則建議冰凍(dòng)保存。樣本的長(zhǎng)時間保存 ，應在-70℃以下。
3.冰凍保存的血清标本須注意避免因停電等造成的反複凍融 。标本的反複凍融所産(chǎn)生的機械剪切力将對标本中的蛋白等分子産(chǎn)生破壞作用，從(cóng)而引起假陰性結果 。此外，凍融标本的混勻亦應注意 ，不要進行劇烈振蕩，反複颠倒混勻即可。
4.要注意避免出現嚴重溶血 。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP爲标記酶的測(cè)定中，如血清标本中血紅蛋白濃度較高 ，則其就很容易在溫育過程中吸附於(yú)固相，從而與後面加入的HRP底物反應顯色。
5.标本在保存中如出現細菌污染所緻的混濁或絮狀物時，應離心沉澱(diàn)後取上清檢測(cè)。
針對以上技術資訊内容，如果您有不太清楚或者瞭(le)解更多信息(包括基本信息/技術資料/解決方案)，都可以随時我司業務員。另外力於(yú)提供生命科學領域的技術服務，提供實驗技術服務，爲廣大科研工作者大大節省瞭(le)重複勞動的時間和精力，我們有過硬的技術咨詢和完善的售後服務，爲您解決後顧之憂。
點擊交流