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血清滅活相關問題解答

  • 發布日期:2024-08-14      浏覽次數:1533
    • 1、問:加到培養基中的血清必須滅(miè)活嗎(ma)?

       
      答:不是必須的,看做什麽(me)實驗瞭(le) 。
       
      2、問:四季青胎牛血清滅(miè)活是56℃30分鍾嗎(ma)?
       
      答:如果用於(yú)培養大多數的腫瘤細胞,血清一般是不需要滅活的 ,這樣可以有效保存血清中的生長因子。但是如果用於(yú)培養一些表面具有補(bǔ)體受體的細胞,如内皮細胞,血清是需要滅活,一般是56℃,30min。
       
      3、問:我要做滋養細胞培養,胎牛血清要滅(miè)活嗎(ma)?
       
      答:進口的一般都已滅活,國(guó)産(chǎn)的不一定,最好還是滅活一下再用較安全。
       
      4、問:我用病毒上清轉染細胞,培養用的血清需要滅活嗎?因爲血清中可能有些補(bǔ)體和抗體,是不是會影響轉染?我想未滅活的血清中含些抗體補(bǔ)體可能會和病毒相結合,影響轉染,正確(què)嗎?細胞是單核細胞白血病細胞,病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。爲什麽要用無血清培養基加病毒孵育幾小時,目的是什麽?
       
      答:血清一定要滅活,可以先用無血清培養基加病毒孵育幾小時以後再加血清 。避免雜蛋白對(duì)病毒和宿主結合過程的幹擾,一般是2-6小時,根據細胞的狀态決定。血清不一定需要滅活,滅活的目的是将血清中的補(bǔ)體滅活!這要根據實際情況而定,如果沒有把握那就滅活吧 ,也不麻煩56度半個小時 。
       
      5、問:(1)我買的是杭州四季青的新生牛血清,要滅活嗎?有些說法是需要,有些說直接解凍(dòng)後就可以加入到培養基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有關(guān)系嗎?
       
      答:關於(yú)血清的熱滅活,是很多人感興趣也存在一定争議的話題。大多數實驗室将血清的熱滅活還是作爲常規來執行,因爲有兩個作用,第一是滅活補體,第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者並(bìng)沒有考慮熱處理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負面影響。
       
      在實驗室處理血清的時候,水浴箱在滅活過程中出現故障,溫度升高到80℃,血清變(biàn)成瞭(le)凝膠狀,重新處理另外一份血清,将兩份血清對比,發現高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時以上,肯定也會對裏面的蛋白起到破壞作用。熱滅活之後,血清放在四度冰箱久瞭(le),就會有沉澱産生,這常常會被認爲是微生物污染或者是黑膠蟲污染。爲瞭(le)驗證到底有沒有污染,常常又會把血清放置37℃溫育,但是血清中的蛋白會進一步析出,最後還是要做鏡檢,無菌培養試驗,和革蘭氏染色試驗,非常麻煩。
       

      有資料顯示,裏面提到70%的實驗者認爲滅活是理所當然的。常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間,而時間則從15分鍾到60分鍾不等。其中常用的手法是56℃熱處理30分鍾。随著(zhe)血清採集 、處理、加工工藝的提高,許多早先認爲是熱滅活的原因已經不再成立,隻有少數對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實瞭(le)這一步驟的有效性和必要性。有人比較過11個不同細胞株 ,發現其中熱滅活對6 個細胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纖維細胞,MRC-5)的生長帶來負面影響,三個細胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響,而隻有兩個細胞株(Balb/3T3,Sp2/0Ag14 hybrid),在熱滅活之後,細胞生長有輕微的改善。所以,在正常的操作下,熱滅活通常對細胞的生長沒有明顯的促進作用。

       

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