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上海恒遠生物科技有限公司 |
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陳 |
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臨床測定技術的發展主要在於方法學的發展，而方法學的發展依托於試劑生産技術不斷進步更新和新型标記物的應用。目前，分子生物學正在並(bìng)zui終肯定會讓我們對整個生命科學有一個全面而*的認識，其對免疫測定技術發展的影響也是直接而又有效的，它使我們對以前一些難以檢測的生物活性物質的測定變得輕而易舉 ，並(bìng)且大大提高瞭(le)檢測的靈敏度和特異性 。
1、基因工程試劑對免疫測定技術發展的影響
免疫測定技術的基礎在於(yú)抗原抗體之間的特異結合反應 ，所以任何的診斷試劑離不開的原料 ，如抗原抗體，酶等。以前用於(yú)免疫測定的抗原通常爲各種純化抗原，而抗體則爲純化抗原免疫動物後獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的單克隆抗體 ，而抗原或抗體的标記物如酶标結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，随著(zhe)分子生物學的發展，使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成爲現實的新一代試劑，各種新型使用的測定方法也不斷出現。
HBsAg試劑特點(diǎn)（檢測(cè)模式：臨床抗體夾心法）：
包被抗體爲山羊多抗，多抗具有高親(qīn)和性和對(duì)抗原各種表位的反應性。
酶表抗體爲與HBsAg有不同結合位點(diǎn)的鼠複合單(dān)位。
可測(cè)得HBsAg變(biàn)異樣品。
提高檢(jiǎn)測(cè)的特異性（99.98%）
提高檢測(cè)的靈敏度，應用Parl Ehrich 學說（PEI）HBsAg标準品，對(duì)ad标準品的靈敏度爲0.05nｇ/ml對(duì)ay标準品靈敏度爲0.025ng/ml
2、基因工程
較早用於免疫測定的基因工程抗原是HBcAg和HBsAg,這兩種基因工程抗原的出現，較好地解決瞭(le)抗HBc和HBe的測定問題。因爲要從病毒本身去大量獲取這兩種純抗原較爲困難，並(bìng)且這一點對於難培養的病原微生物來說，如HIV、HCV和梅毒螺旋體等都有些共性。
2.1 HCV-Elisa試(shì)劑(jì)
HCV目前尚不能體外培養，隻能用基因工程或化學合成方法獲取HCV結構和非結構區的各種抗原片斷，已知HCV基因組有7個功能區組成：核心、E1、E2/NS1 NS2 NS3 NS4 NS5（有分爲NS和NS5b）區，合成抗原的優點是易於(yú)純(chún)化 ，特異性好，抗原抗體反應強 。
2.1.1 *代抗HCV-Elisa試(shì)劑(jì)盒：
-由美國ortho公司克隆C1003抗原幾個片斷與人超氧化物歧化酶（SOD）結合 。用酵母從(cóng)病毒基因組非結合區得到表達(dá) ，表達(dá)爲融合蛋白，亦作爲包被固相載體 。
-抗原組合 ：NS4 區二個(gè)基因片斷(duàn)爲NS 5-1-1和C1003
-特性 ：IgG抗C100在發(fā)病後數月後，才檢出，故不宜作早期診斷(duàn)。
-約由20%的病人不出現抗體(tǐ)。IgM抗-C100急性期檢(jiǎn)出率隻有64%。
-C100的抗原性較(jiào)弱，在HCV複(fù)制中，不能充分暴露宿主的免疫系統 。
-特異性和靈(líng)敏性較(jiào)差 。
2.1.2 第二代HCV-ELISA試(shì)劑(jì)盒
-用基因重組的HCV結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白抗原包被固相載體。
-抗原組(zǔ)合：核心區(qū)（C區(qū)）多肽C22 NS區(qū)多肽C33 C1003和NS 5-1-1
-增加C22區和C33區後(hòu)，抗體出現早，有助早期診斷(duàn)，提高陽性率。有利早期診斷(duàn)。
-C22是早期易出現(xiàn)病毒血症
2.1.3 第三代HCV-ELISA試(shì)劑(jì)盒
人工合成多肽抗原，由36個(gè)氨基酸組成的Cp9（内殼(ké)蛋白）和19個(gè)氨基酸組成Cp10混合包被固相載體。
抗原組(zǔ)合：除有C 100-3 C22 C33 外又增加瞭(le)core 和NS3 NS4 NS5
特點：
*core NS3 NS5由Baculovirus 重組表達，沒有非特異性的 載體，試劑特異性高，重組的蛋白經融合形成大分子抗原，利於(yú)提高檢測(cè)靈敏度。
* NS3 區增加瞭(le)氨基酸片斷(duàn)（比例十分重要）。改進瞭(le)反映的靈敏度。
* NS5 經優化，徐去瞭(le)非特異性的區域（G-D-D）NS3 NS5是血轉化zui早測得的抗體，提高瞭(le)診斷的準確(què)性。
* NS4 爲倆個片斷(duàn)的合成多肽，去掉瞭(le)非特異性反應的區域，加強瞭(le)試劑的靈敏度和特異性。
2.1.4 第四代HCV-ELISA 試(shì)劑(jì)盒
-美國新近推出一種包括HCV基因組7個功能區所有免疫決定基的單一融合蛋白，稱爲多決定基融合抗原，採(cǎi)用表面活性劑處理分界病毒表面複合物，釋放HCV核心抗原（core）並(bìng)用ELISA法，靈敏度可達500拷貝/ml，已接近核酸擴增檢測水平。
-抗原組合：以Core和NS3作爲主要檢測(cè)片斷(duàn)（比例十分重要）加合成多肽NS4
-特點(diǎn)：直接測(cè)Core抗原；
不易發(fā)生變(biàn)異；
抗IgM 和IgG檢(jiǎn)出率可達(dá)100%；
特異性達(dá)99.8%靈(líng)敏度爲100%。
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