基本原理類似於(yú)DNA的天然複制過程,其特異性依賴於(yú)與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。
PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:
①模闆DNA的變(biàn)性:模闆DNA經加熱至94℃左右一定時間後,使模闆DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成爲單鏈,以便它與引物結合,爲下輪反應做準備(bèi);
②模闆DNA與引物的退火(複性):模闆DNA經加熱變(biàn)性成單鏈後,溫度降至55℃左右,引物與模闆DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結合;
③引物的延伸:DNA模闆--引物結合物在Taq酶的作用下,以dNTP爲反應原料,靶序列爲模闆,按堿基配對(duì)與半保留複制原理,合成一條新的與模闆DNA 鏈互補(bǔ)的半保留複制鏈。
重複(fù)循環變(biàn)性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留複(fù)制鏈",而且這種新鏈又可成爲下次循環的模闆。每完成一個循環需2~4分鍾, 2~3小時就能将待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
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