胎牛血清培養血管平滑肌細胞常用的方法有貼塊(kuài)法(explant)和酶解離法(enzyme disperse)。下面一起來(lái)看下這兩種方法。
1.貼塊法
方法：動物經頸動脈放血後，在無菌操作下迅速取出胸腹主動脈段，置於(yú)含Hank's液的平皿中漂洗3次，将凝塊洗幹淨後剝除外膜的纖維脂肪層，然後縱行切開血管，刮除内膜即内皮細胞迅速撕下中膜内 、中層，切成約1mm寬的小條，浸泡在含血清的Hank's液中，並(bìng)将撕下小組織塊種植於(yú)培養瓶壁 。置於(yú)37℃恒溫箱，2h左右，取出培養瓶加入20% HyClone胎牛血清的培養液，再放回培養箱内靜止培養4天 。4天後可見細胞從組織中遷移遊出。
不同動物血管結構有差異，豬和猴較易操作，但小動物如兔、鼠因其血管小，血管壁薄等特點 ，使之難以分離 。另外組織塊太薄，不易粘附培養基，也使細胞較難生長(zhǎng)。爲瞭(le)保證培養的成功，應注意：
①種植組織塊的數目，如75cm2的長(zhǎng)頸瓶組織塊不得少於(yú)30;
②根據(jù)培養細胞的種屬加入适量的不同血清，一般可加入牛血清 ，若小牛血清增殖效果差 ，應加胎牛血清(FBS)，通常濃(nóng)度爲10%～20%;
③培養基的選擇 ：常用的有DMEM(Dulbecco's modified Eagles'medium)，M199培養基。培養兔的平滑肌細(xì)胞用DMEM效果較(jiào)好。
2.酶解離法
沿動脈縱軸切開後，刮除内皮細胞撕下中膜的内2/3，注意不要混入内皮細胞 ，将組織塊切成1-2mm2，放入加有3mg/ml膠原酶的無血清M199培養基中 ，37℃，0.5～1.5h。離心去上清，重複上述消化步驟 ，然後再離心(9000r,4min)，收集細胞，在5%～10%同種血清或HyClone胎牛血清的M199培養基中調(diào)整細胞數，然後轉入30～90mm培養皿中培養，對於(yú)兔子應加入高濃度的谷氨酰胺(0.2g/L)較佳 。不同研究者在培養基、酶濃度以及消化時間等的選擇都有很大的差異 。
3.總結：貼塊法具有獲得平滑肌細胞純度高，量多，操作簡便的優點。但用貼塊法易使平滑肌細胞胞質内肌絲喪失，亞細胞器增加。相反，酶解離法，由於(yú)酶的作用使細胞間失去連接，細胞内肌絲含量豐富，保持收縮型狀态。培養平滑肌細胞常取材於(yú)兔、豬、鼠、猴的胸腹主動脈段。由於(yú)貼塊法和解離法處理方式不同，在細胞培養的zui初階段細胞形态和性質存在差異。随著(zhe)培養時間的延長，培養環境趨於(yú)一緻，細胞特性上也趨於(yú)近似 。
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