做 cell biology 實驗,細胞鋪闆大概是很常見的一個實驗瞭(le)。但是有很多人不是很得要領,鋪得不是均勻: 要麽中間密周圍稀,要麽周圍密中間秃頂(dǐng)。在這裏分享一些一些技巧:
1、一般96孔闆每孔是加100微升細胞懸液,從(cóng)孔的左邊(biān)靠近底部加入,加完半邊(biān)闆後,将未加的細胞懸液混一下再,繼續加剩餘的半邊(biān)闆子,都加完後蓋上蓋子,左手輕輕扶住闆的左邊(biān),右手輕輕敲擊闆的右邊(biān)緣,注意把握力度(一般輕巧敲三下),太強或次數太多會導緻細胞集中成堆,将闆順時針旋轉(逆時針效果不好),依次敲擊剩餘三個邊(biān),靜置約5分鍾,放入37度培養箱。
2、細胞懸液加完後,将細胞培養闆擡高,對著(zhe)燈光,從(cóng)底部往上看,看細胞有沒有抱團。然後從(cóng)底部敲擊,使之分散。
3、如果實驗室有平闆振蕩(dàng)器的話,建議用這個儀器稍振蕩(dàng)一下,效果不錯(cuò),就是振幅小,頻率高的那種。
4、細胞要盡量打散,大部分呈單個狀态。離心後,要充分懸浮!還有轉移到六孔闆後,是要晃得!晃的時候不要讓那個細胞液轉圈,不然細胞就全被帶(dài)到中間去瞭(le),就會不均勻!
5、一瓶細胞長(zhǎng)滿後,正常處(chù)理,在培養瓶裏吹勻,然後鋪6孔闆,每孔2毫升,鋪完之後不用觀察直接用酒精棉擦拭,然後放到培養箱裏,輕微的左三圈 右三圈 前三圈 後三圈。基本上24小時之後觀察 每孔的細胞都會很均勻。
6、計算好所需要的全部液體量和細胞量,混勻後,加到六孔闆裏,六孔闆按橫8字型晃,顯微鏡下觀(guān)察,如果不均勻,按上述方法再晃。如果細胞未計數直接種的話,在種六孔闆的過(guò)程中,随時晃一下混勻用的瓶子,瓶子我通常是順時針或逆時針轉圈。
7、放在水平闆面上先上下移動(dòng),再左右移動(dòng),每個方向5到6次,但關鍵的是搖完後直接放入培養箱中,不要再做過多的運動(dòng),例如放到鏡下去看,否則很容易就又聚到中間去瞭(le)。
上海恒遠生物專業提供生命科學領域的技術服務,提供實驗技術服務,爲廣大科研工作者大大節省瞭(le)重複勞動的時間和精力,我們有過硬的技術咨詢和完善的售後服務,購買ELISA試劑盒贈送免費代測(cè)服務,在線一對一技術指導,爲您解決後顧之憂。