冷凍細胞活化詳細步驟

冷凍原則：冷凍細胞之活化原則爲快速解凍，以避免冰晶重新結晶而對細胞造成傷害，導緻細胞之死亡。 細胞活化後，約需數日，或繼代一至二代。其細胞生長(zhǎng)或特性表現才會恢複正常(例如産(chǎn)生單株抗體或是其它蛋白質)。



一、材料 ：
①37 oC 恒溫(wēn)水槽 
②新鮮培養基 
③無(wú)菌吸管/ 離(lí)心管/ 培養瓶
④液氮或幹(gàn)冰容器 


二、操作步驟(zhòu)： 
①操作人員應戴防護(hù)面罩及手套，防止冷凍(dòng)管可能爆裂之傷害。 
②自液氮或幹冰容器中取出冷凍(dòng)管，檢查蓋子是否旋緊，由於(yú)熱脹冷縮過程
，此時蓋子易松掉。 
③将新鮮培養基置於(yú)37 °C 水槽中回溫，回溫後噴以70 % 酒精並(bìng)擦拭之，移入無菌操作台内。 
④取出冷凍(dòng)管，立即放入37 °C 水槽中快速解凍(dòng)，輕(qīng)搖冷凍(dòng)管使其在1 分鍾内全部融化，以70%ethanol 擦拭保存管外部，移入無菌操作台内。 
⑤取出0.9 ml 解凍(dòng)之細胞懸浮液，緩緩加入有培養基之培養容器内(稀釋比例爲1:10～1:15)，混合均勻，放入CO2 培養箱培養。另取0.1 ml 解凍(dòng)細胞懸浮液作存活測(cè)試。 
⑥解凍(dòng)後(hòu)是否立即去除冷凍(dòng)保護劑(例如DMSO 或glycerol)，依細胞種類而異，一般而言，大都不需要立即去除冷凍(dòng)保護劑。惟若要立即去除，則将解凍(dòng)之細胞懸浮液加入含有5-10 ml 培養基之離心管内，離心1,000 rpm, 5 分鍾，移去上清液，加入新鮮培養基
，混合均勻，放入CO2 培養箱培養。 
⑦若不需立即去除冷凍(dòng)保存劑，則在解凍(dòng)培養後(hòu)隔日更換培養基。


更多實驗資訊可咨詢我司業務員。上海恒遠生物科技有限公司擁有自己的實驗室，備有專業的技術研發團隊，長期緻力於(yú)各種生物試劑，細胞，血清，ELISA試劑盒的研發與銷售，實驗提供免費代測服務，並(bìng)提供技術服務，如果您有實驗上的問題歡迎前來咨詢，爲您提供專業的一對一技術指導。