人封閉抗體（BA）酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用於(yú)測(cè)定人血清，血漿及相關液體樣本中封閉抗體（BA）的含量。
實驗原理：
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定标本中人封閉抗體（BA）水平。用純化的人封閉抗原包被微孔闆(bǎn) ，制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入封閉抗體（BA），再與HRP标記的封閉抗原結合，形成抗原-抗體-酶标抗原複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃(huáng)色 。顔色的深淺和樣品中的封閉抗體（BA）呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中人封閉抗體（BA）濃度。
試劑盒組成：
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試劑盒組成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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說明書 |
1份 |
1份 |
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封闆膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1個 |
1個 |
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酶标包被闆 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
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标準品 ：135ng/L |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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标準品稀釋液 |
1.5ml×1瓶 |
1.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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酶标試劑 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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樣品稀釋液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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顯色劑A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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顯色劑B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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終止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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20倍濃縮洗滌液 |
20ml×1瓶 |
23ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
樣本處理及要求：
1. 血清 ：室溫血液自然凝固10-20分鍾，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱 ，應再次離心 。
2. 血漿：應根據标本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作爲抗凝劑，混合10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心 。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水 、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清 ：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集 。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清 。檢測細胞内的成份時 ，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液 ，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反複凍融，以使細胞破壞並放出細胞内成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心 。
5. 組織标本：切割标本後 ，稱取重量 。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。标本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器将标本勻漿充分 。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測 ，其餘冷凍備用 。
6. 标本採集後盡早進行提取 ，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗 ，可将标本放於-20℃保存 ，但應避免反複凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性 。
操作步驟
1. 标準品的稀釋與加樣：在酶标包被闆上設标準品孔10孔，在*、第二孔中分别加标準品100μl，然後在*、第二孔中加标準品稀釋液50μl，混勻；然後從*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔 ，再在第三、第四孔分别加标準品稀釋液50μl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五 、第六孔中分别加标準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從第五 、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标準品稀釋液50μl，混勻後從第七、第八孔中分别取50μl加到第九 、第十孔中 ，再在第九第十孔分别加标準品稀釋液50μl，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉 。（稀釋後各孔加樣量都爲50μl，濃度分别爲90ng/L，60ng/L ，30ng/L，15ng/L， 7.5ng/L）。
2. 加樣：分别設空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同）、待測樣品孔。在酶标包被闆上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾。
4. 配液：将20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋後備用。
5. 洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄(qì)去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次 ，拍幹。
6. 加酶 ：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色 ：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用，酶标包被闆開封後如未用完，闆條應裝入密封袋中保存 。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋(shì)時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器 ，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做标準曲線，做複孔 。如标本中待測物質含量過高（樣本OD值大於标準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染 。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行 ，試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理。
9． 本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)爲準。
計算：
以标準物的濃度爲橫坐标 ，OD值爲縱坐标，
在坐标紙上繪出标準曲線，根據樣品的OD
值由标準曲線(xiàn)查出相應的濃(nóng)度；再乘以稀釋(shì)
倍數；或用标準物的濃度與OD值計算出标
準曲線的直線回歸方程式 ，将樣品的OD值
代入方程式，計(jì)算出樣品濃(nóng)度 ，再乘以稀釋(shì)
倍數，即爲樣品的實際濃度。
（此圖僅供參考）
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值爲0.990以上。
2.批内與批見應分别小於9%和11%
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月 上海恒遠生物科技公司是國内的經銷商 ，出售各種進口elisa試劑盒，試劑，歡迎各位顧客前來咨詢：http://www.chem17.com/st203584
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