一、原理：
目前，感受态細胞的制備(bèi)常用冰預冷的CaCl2處理細菌的方法制備(bèi)，即用低滲CaCl2溶液在低溫（0℃）時處理快速生長的細菌，從而獲得感受态細菌。此時細菌膨脹成球形，外源DNA分子在此條件下易形成抗DNA酶的羟基-鈣磷酸複合物粘附在細菌表面 ，通過熱激作用促進細胞對DNA的吸收。轉化效率可達106-107轉化子/微克DNA。本方法的關鍵是選用的細菌必須處於(yú)對數生長期，實驗操作必須在低溫下進行。
二、操作 ：
1.取-70℃冰凍(dòng)菌種，用劃線法接種細菌於(yú)培養皿 ，做好标記，於(yú)37℃培養過夜。
2.第二天，從(cóng)平闆上挑取單(dān)個菌落，接種至含有3ml LB培養液的試管中 ，37℃振蕩培養過夜。次日取菌液1ml接種至含有100ml LB培養基的500ml燒瓶中，37℃劇烈震蕩培養約2~3小時（200~300r/min）
3.當(dāng)菌落600nm OD值達(dá)到0.3-0.4時 ，将燒瓶取出放置冰上10~15分鍾 。在無菌條件下把菌液倒入50ml離心管中。4℃，4000g離心10分鍾。
4.棄上清，将管倒置於(yú)幹濾紙上1min，吸幹殘(cán)留的培養液。加10ml 0.1M的CaCl2到離心管中，振蕩混勻，懸浮菌體，冰浴30分鍾。
5.4℃，4000g離心10分鍾，棄上清 ，将管倒置於(yú)幹濾紙上1min，吸幹殘留的培養液。加4ml冰預冷的0.1M的CaCl2,重懸浮菌體。每管0.2ml分裝，至4℃保存備(bèi)用 ，24-48小時内使用效果較好。如果暫時不用，可再保存於(yú)-70℃的低溫冰箱中。
上海恒遠生物科技有限公司擁有自己的實驗室 ，備有專業的技術研發團隊，長期緻力於(yú)各種生物試劑，細胞，血清，ELISA試劑盒的研發與銷售，實驗提供免費代測服務，並(bìng)提供技術服務，如果您有實驗上的問題歡迎前來咨詢，爲您提供專業的一對一技術指導。
點擊交流