小鼠胰島素原Elisa試劑盒說明書
樣本處理及要求：
1. 血清 ：室溫血液自然凝固10-20分鍾 ，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉澱 ，應再次離心。
2. 血漿：應根據标本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作爲抗凝劑，混合10-20分鍾後，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清 ，保存過程中如有沉澱形成，應該再次離心 。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。胸腹水 、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清 ：檢測分泌性的成份時 ，用無菌管收集。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞内的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液 ，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反複凍融 ，以使細胞破壞並放出細胞内成份。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成，應再次離心。
5. 組織标本：切割标本後 ，稱取重量 。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。标本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器将标本勻漿充分。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝後一份待檢測，其餘冷凍備用。
6. 标本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行 ，提取後應盡快進行實驗 。若不能馬上進行試驗 ，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品 ，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟：
1. 标準品的稀釋與加樣：在酶标包被闆上設标準品孔10孔，在*、第二孔中分别加标準品100μl，然後在*、第二孔中加标準品稀釋液50μl，混勻；然後從*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三 、第四孔分别加标準品稀釋液50μl，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分别加到第五 、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标準品稀釋液50ul，混勻；混勻後從第五 、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七 、第八孔中分别加标準品稀釋液50μl，混勻後從第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标準品稀釋液50μl，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋後各孔加樣量都爲50μl，濃度分别爲2400ng/L，1600ng/L ，800ng/L，400ng/L， 200ng/L。
2. 加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、待測樣品孔。在酶标包被闆上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻。
3. 溫育 ：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鍾 。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用 。
5. 洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體 ，甩幹，每孔加滿洗滌液 ，靜置30秒後棄去，如此重複5次 ，拍幹。
6. 加酶 ：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零 ，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鍾以内進行。
注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用，酶标包被闆開封後如未用完，闆條應裝入密封袋中保存 。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器 ，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本OD值大於标準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9． 本試劑不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書爲準。
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