ELISA試劑盒實驗步驟

 ELISA試劑盒實驗步驟

 




1.試劑準備(bèi)：陽性對(duì)照品，酶标抗體，底物，

2.樣(yàng)品提取：所需工具（研缽(bō)）

3.設計酶标闆布局；設兩個(gè)陽性對(duì)照，兩個(gè)空白對(duì)照（空白對(duì)照孔不加樣品  及酶标試劑，其餘各步驟操作相同），樣品孔。

4.加樣(yàng)品到反應孔；每個(gè)孔100ul

5孵育（室溫下2小時）一般均採用水浴，可将ELISA闆置於(yú)水浴箱中，ELISA闆底應貼著(zhe)水面，使溫度迅速平衡。爲避免蒸發，闆上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋闆孔，此時可讓反應闆漂浮在水面上。若用保溫箱，ELISA闆應放在濕盒内，濕盒要選用傳熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui後将ELISA闆放在濕紗布上。濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度，特别是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育，反應闆均不宜疊放，以保證各闆的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴格限制在規定的範圍内，标準室溫溫度是指20-25℃，但具體操作時可根據說明書的要求控制溫育。室溫溫育時，ELISA闆隻要平置於(yú)操作台上即可。應注意溫育的溫度和時間應按規定力求準確。爲保證這一點，一個人操作時，一次不宜多於(yú)兩塊闆同時測定。

6酶标抗體的制備

7洗闆；孵育結束後，将反應孔中試劑倒出，加入250ul的1倍PBST緩沖(chōng)液，之後快速倒出，重複(fù)2次。

8加酶标抗體(tǐ)；每孔100ul

9孵育；室溫2小時

10PNP底物的制備

11洗闆

12加底物

13孵育；30到60分鍾

14終止反應；50ul 3摩爾(ěr)的*（選(xuǎn)作）