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除蟲菊酯檢測試劑盒的合成方法

  • 發布日期:2014-02-26      浏覽次數:1532
    • 除蟲菊酯檢測試劑盒由美國abraxis合成,這一項試劑的研究爲生物領域帶來瞭另一類新篇章 。以下是除蟲菊酯檢測試劑盒的原理,操作步驟,及其注意事項 ,讓我們來看看除蟲菊酯檢測試劑盒是怎麽合成的吧。

      适用
      Abraxis合成除蟲菊酯檢測試劑盒适用於定量檢測水樣中(底下水,表面水,井水)苄氯菊脂和相關的合成除蟲菊酯(見後面的交叉反應表)。水樣的前處理步驟請看說明書。如果要檢測土壤,作物 ,和食品樣品的話請本公司索取相關資料。
      原理
      Abraxis合成除蟲菊酯檢測試劑盒應用瞭酶聯免疫檢測原理測定苄氯菊脂和相關的合成除蟲菊酯 。測試樣品和包被有合成除蟲菊酯特異性抗體的磁性顆粒一起加入到一次性測試管中孵育20分鍾。然後添加合成除蟲菊酯酶結合物。樣品中的合成除蟲菊酯和合成除蟲菊酯酶結合物相互競争於磁性顆粒上的抗體結合位點。孵育30分鍾,在反應中磁場應用於固定測試管中的順磁顆粒(指結合合成除蟲菊酯和酶标苄氯菊脂複合物的磁性顆粒,和它們的初始濃度成正比),同時允許把沒有結合的試劑處理掉。在倒掉沒有發生反應的試劑後用洗液清洗這些顆粒。通過添加酶底物(*)和顯色劑(TMB)可以檢測到合成除蟲菊酯。結合到合成除蟲菊酯抗體上的苄氯菊脂酶标物催化底物/顯色液混合物産瞭有色物質。經過30分鍾的孵育,加入酸溶液終止穩定反應。因爲酶标苄氯菊脂(結合物)和沒有标記的合成除蟲菊酯(樣品)在反應中競争於抗體位點結合 ,所以顯色的深淺和樣品中合成除蟲菊酯的濃度成反比。
      試劑盒組成
      1、包被有合成除蟲菊酯抗體的磁性顆粒。
      合成除蟲菊酯抗體(抗苄氯菊脂單克隆抗體)被包被於磁性顆粒上,這些顆粒懸浮於包含有保護劑和穩定劑的鹽性緩沖液中。100測試,1瓶60mL。
      2、合成除蟲菊酯酶結合物。
      HRP标記的苄氯菊脂類似物被稀釋在包含有保存劑和穩定劑的鹽性緩沖液中。100測試,1瓶30mL。
      3、苄氯菊脂标準品
      5瓶苄氯菊脂标準品(0.75、2.5、5.0、15.0 ppb),每瓶2.0 mL,保存於含有保護劑和穩定劑的甲醇溶液中。
      4、對照 1瓶2ml
      濃度爲3.0 ppb 的苄氯菊脂,保存於含有保護劑和穩定劑的甲醇溶液中。
      5、稀釋劑/零标準
      含有保護劑和穩定劑的甲醇溶液,不含有任何可以檢測到的苄氯菊脂 。100檢測,1瓶35mL。
      6、顯色溶液
      含有*和TMB的有機堿溶液。100檢測,1瓶65mL。
      7、終止液
      0.5%的稀硫酸溶液 ,100檢測,1瓶60 mL。
      8、洗液
      加防腐劑的無離子水,100檢測,1瓶250 mL
      9、測試管
      測試管,每包36支,100檢測,共3包。

      測試步驟
      在操作之前一定要仔細閱讀以上内容。
      1、對於水樣可以直接按此說明書處理,如果是其它樣品顆粒請我公司索取特定的樣品處理方法。
      2、标記測試管 ,使标準、樣品和對照區分開。
      管号        1、2        3,4        5,6        7,8        9,10        11        12        13        14
      測試管内容物        Diluent/Zero Standard,
      0 ppb        Standard1
      0.75 ppb        Standard2
      2.5 ppb        Standard3
      5.0 ppb        Standard4
      15.0 ppb        Control        Sample1        Sample2        Sampe3
      3、在對應的測試管中加入250 uL标準,對照或樣品 。
      4、混勻包被有合成除蟲菊酯抗體的磁性顆粒溶液,然後每個測試管加入500 uL。
      5、渦旋震蕩1到2秒,盡量不要産生氣泡。
      6、在室溫下孵育20分。
      7、在每個測試管加入250 uL合成除蟲菊酯酶結合物。
      8、渦旋震蕩1到2秒,盡量不要産生氣泡。
      9、在室溫下孵育30分。
      10、在磁性分離架分離2分鍾。
      11、用同樣的操作手法輕輕倒出所有測試管中的液體,並輕輕地把剩餘液體吸取幹淨 。
      12、每個測試管中加入1 mL洗液,渦旋震蕩1到2秒,再在磁性分離器上分離2分鍾。
      13、從分離器上拿起支架,慢慢翻轉來傾倒測試管中的液體,動作一定要平緩保證液體是沿著試管的一邊持續的流出。一直到支架反瞭過來的時候放在吸水墊上面使試管壁上的水被吸出。提起來支架然後再放到吸水墊上面,反複操作幾次確保試管壁上的液體全部被移除。
      14、重複步驟12,13 一次。
      15、從分離器上拿下支架,然後每個測試管中加入500 uL的顯色液。
      16、渦旋震蕩1到2秒,盡量不要産生氣泡。
      17、在室溫下孵育30分。
      18、在每個測試管中加入500 uL的終止液。
      19、在一個幹淨的測試管中加入1 mL洗液,作爲步驟20中的空白。
      20、在加入終止液15分鍾後,在450nm的分光光度計測定。
      結果
      手工計算
      1、        計算每個标準的吸光度值。
      2、        計算每個标準的%B/Bo(每個标準的吸光度值除以 稀釋劑/零标準 的吸光度值)。
      3、        以每個标準的%B/Bo值的Log 爲Y軸,合成除蟲菊酯濃度的Ln爲X軸作圖繪制标準曲線。
      4、        把樣品或對照的%B/Bo插入到标準曲線就可以計算出結果。