ATCC細胞培養的具體操作方法

ATCC細胞培養的具體操作方法
基本原理 
通過在支持物（如蓋玻片）上培養貼壁細胞，可以應用抗體檢測細胞表面抗原的表達或進行酶細胞化學以及免疫細胞化學檢測。該方法的優點是細胞貼壁牢固，能夠維持細胞生長時的狀态
。
試劑和設備
細胞懸浮液；
6孔平底組織培養闆
，或φ60 mm培養皿；
18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸於75%乙醇中的蓋玻片；
含血清培養基（通常爲 RMPI 1640,含10% 小牛血清，100U/ml青黴素，100μg/ml鏈黴素）；
超淨工作台； CO2孵箱；
蓋片鑷；
操作步驟
1．用蓋片鑷将蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭幹淨，不要用紗布；
2．将蓋玻片輕輕放入6孔培養闆（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射範圍内20-30 厘米處照射2-3小時；
4．将經過計數的細胞懸浮液移入培養闆中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．将培養闆在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養闆底部2/3面積時，将培養闆取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗後即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明
1．本方法适用於貼壁細胞培養，而不适用於懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該爲玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀态一緻的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可将蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。