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免疫組化染色對切片有三方面的技術要求

  • 發布日期:2014-04-24      浏覽次數:2407
    • 切片必須(xū)完整、均勻、平展、無(wú)鄒折、
      應用於(yú)免疫組織化學染色的切片,對切片的質量要求較高,切片必須完整,平展、無汽泡,無鄒折 ,這樣有利在染色時的沖洗,有利於(yú)切片的牢固附貼。如果切片不平展,免疫組化染色後,可出現染色不均勻的現象,顔色深淺不一, 不平。如果切片有汽泡切片在烘烤時,由於(yú)汽泡的破裂影響瞭(le)汽泡周圍的組織,在其周圍可觀察到深淺不一的染色。如果切片有鄒折,免疫組化染色後,在鄒折的地方有深淺不一的顔色,這是一種假陽性,容易引走混淆 。
      切片的附貼(tiē)必須牢固,必須使用合适的粘貼(tiē)劑(jì)。
      免疫組織化學染色前的前期準備工作,就是必須對新的載玻片進行處理,新的載玻片表面看起來很幹淨,有人認爲不需要進行任何的處理,都能夠适合使用 ,這是一種錯誤的想法。新出廠的載玻片,表面複蓋著(zhe)開一層油脂樣的物質,如果不加以處理,對切片的附貼是極爲不利的。我們的做法是:新的載玻片,放於(yú)玻璃清洗液中浸泡4小時甚至過一夜,然後取出,經自來水*沖洗後,浸入酒精中達2小時以上,取出擦幹備用或烘幹也可。

      切片必須烘烤附貼牢固,既要經得起抗原修複(fù)時高溫的作用而不使輕易脫片,又不至於(yú)破壞抗原。
      應用於(yú)免疫組化染色的切片。由於(yú)整個過程需經幾個階段的處理,如抗原修複時抗原修複液的沸騰且需持續十幾分鍾,PBS的反複沖(chōng)洗,有的甚至於(yú)4℃冰箱中孵育達十幾小時。

      切片脫蠟必須幹(gàn)淨,否則将會影響免疫組化染色的zui後(hòu)結果。
      蠟不溶於(yú)水,不與其它的臨床使用的抗體相融合。它隻能靠特用的試劑,處(chù)理足夠的時間,才能将其除去。如果脫蠟不幹淨,少許蠟存留於(yú)切片上,将會引起許多弊病,如染色不均勻,陽性物時隐時現,真假難辨,背景染色增加等。