小鼠β内啡肽(β-EP)酶聯免疫分析(ELISA)
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用於(yú)測(cè)定小鼠血清,血漿及相關液體樣本中β内啡肽(β-EP)含量。
實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中小鼠β内啡肽(β-EP)水平。用純化的小鼠β内啡肽(β-EP)抗體包被微孔闆,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入β内啡肽(β-EP),再與HRP标記(jì)的β内啡肽(β-EP)抗體結合,形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物,經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的β内啡肽(β-EP)呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過标準曲線計算樣品中小鼠β内啡肽(β-EP)濃度。
樣本處理及要求:
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鍾,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過(guò)程中如出現沉澱(diàn),應再次離心。
2.血漿:應根據标本的要求選擇EDTA、者檸檬酸鈉或肝素作爲抗凝劑,混合10-20分鍾後,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱(diàn)形成,應該(gāi)再次離心。
3.尿液:用無菌管收集,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉澱(diàn)形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參(cān)照實行。
4.細胞培養上清:檢測(cè)分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測(cè)細胞内的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反複凍融,以使細胞破壞並(bìng)放出細胞内成份。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉澱形成,應再次離心。
5.組織标本:切割标本後,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備(bèi)用。标本融化後仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器将标本勻漿充分。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝後一份待檢測(cè),其餘冷凍備(bèi)用。
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