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原代與傳代培養之前的區别

  • 發布日期:2014-10-09      浏覽次數:6287
    • 原代培養:即*次培養,是指将培養物放置在體外生長(zhǎng)環境中持續培養,中途不分割培養物的培養過(guò)程。有幾方面含義: 
           培養物一經(jīng)接種到培養器皿(瓶)中就不在分割,任其生長(zhǎng)繁殖; 
           原代培養中的“代”並(bìng)非細胞的“代”數,因爲培養過程中細胞經多次分裂已經産(chǎn)生多代子細胞; 
           原代培養過(guò)程中不分割培養物不等於(yú)不更換培養液,也不等於(yú)不更換培養器皿。 
      正常 細胞培養 的世代數有限 ,隻有癌細胞和發生轉化的細胞才能無限生長(zhǎng)下去。所謂轉化即是指正常細胞在某種因子的作用下發生突變(biàn)而具有癌性的細胞。目前世界上許多實驗室所廣泛傳用的HeLa細胞系就是1951年從一位名叫Henrietta Lacks的婦女身上取下的宮頸癌 細胞培養 而成。此細胞系一直延用至今。 
      原代培養的細胞一般傳至10代左右就不易傳下去瞭(le),細胞的生長就會出現停滞,大部分細胞衰老死亡。但是有極少數的細胞能夠度過“危機”而繼續傳下去,這些存活的細胞一般能夠傳到40~50代,這種傳代細胞叫做細胞株。細胞株的遺傳物質沒有發生改變,在培養過程中其特征始終保持。當細胞株傳至50代以後又會出現“危機”,不能再傳下去。但是有部分細胞的遺傳物質發生瞭(le)改變,並(bìng)且帶有癌變的特點,有可能在培養條件下無限制地傳代下去,這種傳代細胞稱爲細胞系。 
      原代培養是建立各種細胞系(株)必經的階段,其是否成功與組織污染與否、供體年齡、培養技術和方法、适宜培養基的選擇等多種因素有關。由於(yú)原代培養的細胞轉化性極小,對病毒敏感性好,因此适應制備(bèi)疫苗等生物制品;但也存在有潛在外源因子、不能事先檢查标本、且受供體年齡健康狀況的影響而導緻批間差異大等缺陷。目前常用的原代 細胞培養 有雞胚成纖維細胞及豬腎、猴腎、地鼠腎等原代細胞。 
      原代培養的基本過程包括取材、培養材料的制備(bèi)、接種、加培養液、置培養條件下培養等步驟,在所有的操作過程中 ,都必須保持培養物及生長(zhǎng)環境的無菌。 
      多數情況下,分散的細胞若屬於(yú)貼壁依賴型細胞,就能黏附、鋪展於(yú)培養器皿和載體表面生長而形成細胞單層,這種培養方式稱爲單層 細胞培養 (monolayer culture),又叫貼壁培養(adherent culture)。少數情況下,培養的細胞沒有貼壁依賴性,可通過專門設備(bèi)使細胞始終處於(yú)懸狀态而在體外生長,這種形式稱爲懸浮培養(suspension culture)。如何讓接種的細胞盡快貼壁,是決定培養成功的關鍵步驟: 
             取決於(yú)适當的生長(zhǎng)基質表面; 
             可降低接種後培養液對(duì)細胞的浮力,如先少補(bǔ)加少量培養液,待細胞貼壁後再補(bǔ)足營養液繼續培養; 
             注意适當(dāng)的細(xì)胞接種密度,一般105個(gè)/ml左右。 
      傳代培養:當原代培養成功以後,随著(zhe)培養時間的延長和細胞不斷分裂,一則細胞之間相互接觸而發生接觸性抑制,生長速度減慢甚至停止;另一方面也會因營養物不足和代謝物積累而不利於(yú)生長或發生中毒。此時就需要将培養物分割成小的部分,重新接種到另外的培養器皿(瓶)内,再進行培養。這個過程就稱爲傳代(passage)或者再培養(subculture)。對單層培養而言,80%彙合或剛彙合的細胞是較理想的傳代階段。 
      體外培養技術中所謂的傳“代”概念並(bìng)不等於(yú)細胞生物學中“親代細胞”與“子代細胞”中“代”的概念。傳代培養的實質就是分割後再一次培養,可以相對地衡量培養物的培養年齡