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恒遠提供植物2,6-二磷酸果糖酶試劑盒詳細操作書

  • 發布日期:2014-11-14      浏覽次數 :1811
    • 上海恒遠生物供應植物2,6-二磷酸果糖試劑盒,我司爲您提供詳細的報價及參考資料,爲您的實驗保價護航。植物2,6-二磷酸果糖試劑盒現貨供應,咨詢訂購。
      本試劑盒僅供研究使用。
      檢測範圍: 96T
      6U/L -300U/L
      使用目的:
      本試劑盒用於測定植物組織,細胞及其它相關樣本中2,6-二磷酸果糖含量。
      實驗原理
      本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中植物2,6-二磷酸果糖水平。用純化的植物2,6-二
      磷酸果糖抗體包被微孔闆,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物2,6-二磷酸果
      糖,再與HRP 标記的2,6-二磷酸果糖抗體結合,形成抗體-抗原-酶标抗體複合物,經過*
      洗滌後加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成zui
      終的黃色。顔色的深淺和樣品中的植物2,6-二磷酸果糖呈正相關。用酶标儀在450nm 波長
      下測定吸光度(OD 值),通過标準曲線計算樣品中植物2,6-二磷酸果糖濃度 。
      試劑盒組成
      1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
      2 酶标試劑 6ml×1 瓶 8 标準品(400U/L) 0.5ml×1 瓶
      3 酶标包被闆 12 孔×8 條 9 标準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
      4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
      5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封闆膜 2 張
      6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
      标本要求
      1.标本採集後盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能
      馬上進行試驗,可将标本放於-20℃保存,但應避免反複凍融
      2.不能檢測含NaN3 的樣品,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
      操作步驟
      1. 标準品的稀釋 :本試劑盒提供原倍标準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
      釋。
      200U/L 5 号标準品 150μl 的原倍标準品加入150μl 标準品稀釋液
      100U/L 4 号标準品 150μl 的5 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
      50U/L 3 号标準品 150μl 的4 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
      25U/L 2 号标準品 150μl 的3 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
      12.5U/L 1 号标準品 150μl 的2 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
      2. 加樣:分别設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶标試劑,其餘各步操作相同)、标準孔、
      待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,
      然後再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度爲5 倍)。加樣将樣品加於酶标闆孔底部,盡
      量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
      3. 溫育:用封闆膜封闆後置37℃溫育30 分鍾。
      4. 配液:将30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用
      5. 洗滌:小心揭掉封闆膜,棄去液體,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30 秒後棄去 ,如此
      重複5 次,拍幹 。
      6. 加酶:每孔加入酶标試劑50μl,空白孔除外。
      7. 溫育:操作同3。
      8. 洗滌:操作同5。
      9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
      15 分鍾.
      10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
      11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止
      液後15 分鍾以内進行。
      操作程序總結:
      計算
      以标準物的濃度爲橫坐标,OD 值爲縱坐标,在坐标紙上繪出标準曲線,根據樣品的
      OD 值由标準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用标準物的濃度與OD 值計算出标
      準曲線的直線回歸方程式,将樣品的OD 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,
      即爲樣品的實際濃度。
      注意事項
      1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鍾後方可使用,酶标包被闆開封後如未
      用完,闆條應裝入密封袋中保存。
      2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
      3.各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間
      控制在5 分鍾内,如标本數量多,推薦使用排槍加樣。
      4. 請每次測定的同時做标準曲線,做複孔。如标本中待測物質含量過高(樣本OD 值
      大於标準品孔*孔的OD 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n 倍)後再測定,計
      算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
      5. 封闆膜隻限一次性使用,以避免交叉污染。
      6.底物請避光保存。
      7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
      8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
      9.本試劑不同批号組分不得混用。
      保存條件及有效期
      1.試劑盒保存:;2-8℃。
      2.有效期:6 個月