培養細胞傳代根據不同細胞採(cǎi)取不同的方法。貼壁生長(zhǎng)的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長(zhǎng)的細胞用直接吹打可傳代；懸浮生長(zhǎng)的細胞可以採(cǎi)用直接吹打或離心分離後傳代，或用自然沉降法吸除上清後，再吹打傳代。
1．人無(wú)菌室之前用肥皂洗手 ，用75％酒精擦拭消毒雙(shuāng)手。
2．倒置顯微鏡下觀察細胞形态 ，確(què)定細胞是否需要傳(chuán)代及細胞需要稀釋的倍數。将培養用液置37℃下預熱 。
3．超淨(jìng)台台面應整潔，用0.1％新潔爾(ěr)滅溶液擦淨(jìng)。
4．打開超淨台的紫外燈(dēng)照射台面20min左右 ，關閉(bì)超淨台的紫外燈(dēng)，打開抽風機清潔空氣，除去臭氧。
5．點(diǎn)燃酒精燈(dēng)；取出無菌試管 ，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮頭；過酒精燈(dēng)火焰略燒後插在無菌試管内。
6．将培養用液瓶口用75％酒精消毒，過酒精燈(dēng)火焰後斜置於(yú)酒精燈(dēng)旁的架子上 。
7．倒掉培養細胞的舊(jiù)培養基。酌情可用2—3mLHanks液洗去殘(cán)留的舊(jiù)培養基 ，或用少量胰酶涮洗一下。
8．每個大培養瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋後在倒置顯微鏡下觀察 ，當(dāng)細胞收回突起變(biàn)圓時立即翻轉培養瓶，使細胞脫離胰酶，然後将胰酶倒掉 。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
9．加入少量的含血清的新鮮培養基，反複吹打消化好的細胞使其脫壁並(bìng)分散，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基(7～10mL／大瓶 ，3～5mL／小瓶)制成細胞懸液，然後分裝到新培養瓶中。蓋上瓶蓋，适度擰緊後再稍回轉，以利於(yú)CO2氣體的進入，将培養瓶放回CO2培養箱。
10．對(duì)懸浮培養細胞，步驟7-9不做。可将細胞懸液進行離心去除舊培養基上清，加入新鮮培養基，然後(hòu)分裝到各瓶中。
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