豬瘟抗體ELISA實驗操作要領

山東(dōng)農業大學的趙老師於(yú)去年12月在我公司代測豬瘟抗體，白介素，幹擾素等相關系列21個指标的ELISA實驗：現需發表文獻特我公司關於豬瘟抗體等實(shí)驗的詳細操作流程，我司技術(shù)做出如下詳細解答：

1．用包被液将豬瘟弱毒單(dān)抗純(chún)化酶聯抗原、豬瘟強毒單(dān)抗純(chún)化酶聯抗原各做100倍稀釋，每孔包被100μl，4℃濕盒放置一夜。
2．次日取出，甩去孔内液體(tǐ)，3×3′沖洗。
3．将待檢血清以PBS液做400倍稀釋，每孔加100μl同時(shí)将豬瘟陽(yáng)性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋，於對照孔中加100μl。37℃溫育1.5h～2h。
4．重複(fù)第二步，取出，甩去孔内液體(tǐ)，3×3′洗滌。
5．将兔抗豬IgG酶标抗體以PBS液做100倍稀釋，每孔加100μl，37℃溫育1.5h～2h。
6．重複第4步
。
7．每孔加底物溶液100μl，室溫下觀察顯色反應。當(dāng)陰性對照孔稍顯色時，立即終止反應，並(bìng)以陰性孔做空白對照。
8．每孔加終止液50μl立即於(yú)酶聯免疫吸附檢測(cè)儀測(cè)定490nm波長的光密度。
（三）結果判定
在豬瘟弱毒酶聯闆上，OD≥0.2，爲豬瘟弱毒抗體陽性；OD＜0.2，爲(wèi)豬瘟弱毒抗體(tǐ)陰性。
在豬瘟強毒酶聯闆上，OD≥0.5，爲豬瘟強毒抗體陽性；OD＜0.2，爲豬瘟強毒抗體陰性。