恒遠解析檢測VEGF促進血管内皮細胞增殖活性的方法

          上海恒遠生物解析檢測VEGF促進血管内皮細胞增殖活性的方法

血管生成（Angiogenesis）是指從(cóng)已有的毛細血管或毛細血管後靜脈發(fā)展而形成新的血管，主要包括：激活期血管基底膜降解；血管内皮細胞的激活、增殖、遷移；重建形成新的血管和血管網，是一個涉及多種細胞的多種分子的複雜過程。血管形成是促血管形成因子和抑制因子協調作用的複雜過程，正常情況下二者處(chù)於(yú)平衡狀态，一旦此平衡打破就會激活血管系統，使血管生成過度或抑制血管系統使血管退化。

1．用牛腎上腺内皮細胞（AEC）檢測VEGF活性

1）取12孔細胞培養闆，每孔加0.5ml含1×10⁴牛腎(shèn)上腺血管内皮細(xì)胞的細(xì)胞培養液。

2）用含0.2％明膠的PBS系列稀釋(shì)待測(cè)樣品，每孔加0.5ml稀釋樣品，以後(hòu)隔天更換同樣濃度的稀釋樣品；對(duì)照孔加0.5ml細胞培養液。在37℃ 5％ CO₂的飽(bǎo)和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～5天。

3）用MTT法、[³H]脫氧胸苷摻(càn)入法或直接用胰蛋白酶消化後計數細胞的方法計數生長(zhǎng)的細胞數。繪制劑量-反應曲線，取能引起50％zui大增殖反應的zui高樣品稀釋(shì)度爲(wèi)1U VEGF。

上海恒遠生物供應的血管内皮生長(zhǎng)因子試劑盒（英文：vascular endothelial growth factor，簡稱(chēng)：VEGF），早期亦稱(chēng)作血管通透因子（英文：vascular permeability factor，簡稱(chēng)：VPF)，是血管内皮細胞特異性的肝素結合生長(zhǎng)因子（heparin-binding growth factor），可在體内誘導(dǎo)血管新生（induce angiogenesis in vivo）。本月主推大鼠，小鼠，人等種屬試(shì)劑(jì)盒，咨詢。

2．用人臍帶靜脈内皮細胞（HUVE）檢測VEGF活性

1）分離HUVE。取明膠包被的48孔細胞培養闆，每孔加6000個細胞，含15mmol/L Hepes、20％胎牛血清和抗生素的199培養液，以及用同樣培養液系列稀釋的待測(cè)樣品，總體積(jī)0.4ml。在37℃ 5％ CO₂的飽(bǎo)和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12小時。

2）加入0.64μCi（23.68kBq）[³H]脫氧胸苷，繼續培養60小時，用含1％ BSA的pH7.5 Hank液洗滌各孔。用含0.1mol/L NaOH的0.2mol/L Na₂CO₃溶液溶解細胞，釋放DNA。溶解物在液體閃爍計(jì)數儀上計(jì)數放射性摻(càn)入量，同上決定樣品中VEGF的含量。