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恒遠針對植物組織樣本的處理辦法解析

  • 發布日期:2015-08-06      浏覽次數:2071
    • 上海恒遠生物提醒收集标本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定 。對收集後當天進行檢測的标本 ,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集标本,将标本及時分裝後放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反複凍融。标本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月。-70度可保存6個月。部分激素類标本需添加抑肽酶 。以下恒遠針對植物組織樣本的處理辦法進行說明:歡迎參考應用。

      一、勻漿介質

      一般採(cǎi)用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可根據樣本及測(cè)定指标的情況自行設定濃度,目的是保持樣本的等滲環境。

      二、組織勻漿的制備

      1、取組織塊(0.2g~0.5g)zui少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,濾紙拭幹,準確(què)稱(chēng)重,放入5ml的勻漿管中。

      2、按重量(g):體積(jī)(ml)=1:4的比例加入4倍體積(jī)的勻漿介質於(yú)勻漿管中,冰水浴條件下,用眼科小剪盡快剪碎組織塊。

      3、勻漿(jiāng)的方式:手工勻漿(jiāng),機(jī)器勻漿(jiāng)。

      ① 手工勻漿:左手持勻漿管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将搗(dǎo)杆垂直插入套管中,上下轉動(dòng)研磨數十次(6~8分鍾),充分研碎,制成20%的勻漿液。

      ② 機器勻漿:用組織搗碎機10000~15000 轉/分 上下研磨制成20%組織勻漿,也可用内切式組織勻漿機制備(bèi)(勻漿時間10秒/次,間隙30秒,連續3~5次,在冰水中進行,可适當延長(zhǎng)勻漿時間),

      鏡檢觀(guān)察:取少量組織勻漿作塗片(直接塗片、染色均可以),顯微鏡下觀(guān)察細胞是否破碎,若沒有則可延長(zhǎng)勻漿時間。

      4、将制備(bèi)好的20%勻漿液用普通離心機或低溫低速離心機4000轉/分左右,離心10~15分鍾,取上清液進行測(cè)定.

      三、樣本保存:

              植物組織樣本暫時不測(cè)定,可立即低溫凍(dòng)存,溫度越低越好,中間如*凍(dòng)融,-20℃以下可保存三個月,-70℃以下可保存六個月。

              制備(bèi)好的勻漿液建議不要凍存,當天進行測(cè)定,如放置時間過長相關酶活會有所下降,部分指标4℃可存放3~5天(如SOD要存放2~3天,MDA可存放3~5,總蛋白測(cè)定可存5~7天等)