牛肉膏蛋白胨培養基的配方

實驗方法原理
牛肉膏蛋白胨培養基是一種應用zui廣泛和zui普通的細菌基礎培養基，有時又稱爲普通培養基。由於這種培養基中含有一般細菌生長繁殖所需要的zui基本的營養物質，所以可供作微生物生長繁殖之用。基礎培養基含有牛肉膏、蛋白胨和NaCI。其中牛肉膏爲微生物提供碳源、能源、 磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCI提供無機鹽。在配制固體培養基時還要加人一定量瓊脂作凝固劑，瓊脂在常用濃度下96℃時溶化，實際應用時，一般在沸水浴中或下面墊以石棉網煮沸溶化，以免瓊脂燒焦。瓊脂在40℃時凝固，通常不被微生物分解利用。固體培養基中瓊脂的含量根據瓊脂的質量和氣溫的不同而有所不同。
 
由於這種培養基多用於培養細菌，因此要用稀酸或稀堿将其pH調至中性或微堿性，以利於細菌的生長繁殖。

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。本章上海恒遠将爲您具體解析牛肉膏蛋白胨培養基的配方
：

牛肉膏：3.0 g
蛋白胨：10.0 g
NaCI：5.0 g
水：1 000 ml
pH：7.4-7.6
 
試劑、試劑盒
牛肉膏蛋白胨NaCI水瓊脂*鹽酸
儀器、耗材
試管三角瓶燒杯量筒玻璃棒培養基分裝器天平牛角匙高壓蒸氣滅菌鍋pH試紙棉花牛皮紙記号筆麻繩紗布?
實驗步驟
一、稱量 
 
按培養基配方比例依次準確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放人燒杯中，牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在小燒杯或表面皿中稱量
，用熱水溶化後倒人燒杯。也可放在稱量紙上，稱量後直接放人水中，這時如稍微加熱，牛肉膏便會與稱量紙分離，然後立即取出紙片。

蛋白胨很易吸濕，在稱取時動作要迅速。另外，稱藥品時嚴防藥品混雜，一把牛角匙用於一種藥品，或稱取一種藥品後，洗淨，擦幹，再稱取另一藥品
。瓶蓋也不要蓋錯。
 
二、溶化

在上述燒杯中先加人少於所需要的水量，用玻棒攪勻，然後，在石棉網上加熱使其溶解，或在磁力攪拌器上加熱溶解（圖1）将藥品*溶解後，補充水到所需的總體積，如果配制固體培養基時，将稱好的瓊脂放人已溶的藥品中，再加熱溶化，zui後補足所損失的水分，在制備用三角瓶盛固體培養基時，一般也可先将一定量的液體培養基分裝於三角瓶中，然後按1.5%-2.0%的量将瓊脂直接分别加人各三角瓶中，不必加熱溶化，而是滅菌和加熱溶化同步進行，節省時間。
 
在瓊脂溶化過程中，應控制火力，以免培養基因沸騰而溢出容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。配制培養基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養基中，影響細菌生長。
 
三、調pH 
 
在未調pH前，先用楂密pH試紙測量培養基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養基中逐滴加 人1 mol/L NaOH邊加邊攪拌，並随時用pH試紙測其pH，直至pH達7.6。反之，用lmol/L HCl進行調節。
 
對於有些要求pH較的微生物，其pH的調節可用酸度計進行（使用方法可參考有關說明書）。
 
pH不要調過頭，以避免回調而影響培養基内各離子的濃度。配制pH低的瓊脂培養基時，若預先調好pH並在高壓蒸氣下滅菌，則瓊脂因水解不能凝固。因此
，應将培養基的成分和瓊脂分來滅菌後再混合，或在中性pH條件下滅菌，再調整pH。
 
四、過濾 
 
趁熱用濾紙或多層紗布過濾，以利某些實驗結果的觀察，一般無特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實驗勿需過濾）。

五、分裝 
 
1.  按實驗要求，可将配制的培養基分裝人試管内或三角燒瓶内。分裝裝置見圖2。
 培養基分裝裝置
A.  漏鬥分裝裝置；B. 自動分裝器 
1.  鐵架；2.  漏鬥；3.  乳膠管；4.  彈簧夾；5.  玻管；6.  流速調節；7.  裝量調節；8.  開關
 
2.  液體分裝

分裝高度以試管髙度的1/4左右爲宜。分裝三角瓶的量則根據需要而定，一般以不超過三角瓶容積的一半爲宜，如果是用於振蕩培養用
，則根據通氣量的要求酌情減少；有的液體培養基在滅菌後，要補加一定量的其他無菌成分，如抗生素等，則裝量一定要準確。
 
3.  固體分裝

分裝試管，其裝量不超過管高的1/5，滅菌後制成斜面。分裝三角燒瓶的量不超過三角燒瓶容積的一半爲宜。
 
4.  半固體分裝

試管一般以試管髙度的1/3爲宜，滅菌後垂直待凝。
 
分裝過程中，注意不要使培養甚沾在管（瓶）上，以免沾污棉塞而引起污染。
六
、加塞 
 
培養基分裝完畢後，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞及試管帽等)，以阻止外界微生物進人培養基内而造成污染，並保證有良好的通氣性能。
 
七、包紮 
 
加塞後，将全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞， 其外再用一道麻繩紮好，用記号筆注明培養基名稱、組别、配制日期。三角燒瓶加塞後，外包牛皮紙，用麻繩以活結形式紮好，使用時容易解開，同樣用記号筆注明培養基名稱、組别、配制曰期（有條件的實驗室，可用市售的鋁箔代替牛皮紙，省去用繩紮，而且效果好。）
八、滅菌 
 
将上述培養基以0.103 MPa，121℃，20 min高壓蒸氣滅菌。
 
九、擱置斜面 
 
将滅菌的試管培養基冷至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），将試管口端擱在玻棒或其他合适高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半爲宜（圖3）。
 

十、無菌檢查 
 
将滅菌培養基放人37 ℃的溫室中培養24-48 h，以檢査滅菌是否*。