洗闆目的在於(yú)将特異性結(jié)合於(yú)固相上的抗原(抗體)與溫育過(guò)程中吸附的非特異性成份分離(lí),使免疫複合物與待測抗體(抗原)呈一定比例,洗闆是否合格直接影響檢測(cè)結果的準確(què)性。洗闆應嚴格按照說明控制洗闆時(shí)間(jiān)及洗闆次數,ELISA 檢測一般用洗滌液洗闆3 次,洗滌(dí)液應嚴格按照操作說明進(jìn)行稀釋, 洗液應注滿每個(gè)微孔並(bìng)注意洗液不外溢,垂直甩闆避免交叉污染,防止出現(xiàn)假陰性及假陽性結(jié)果。使用洗闆機(jī)洗闆可一定程度上避免環(huán)境污染、提高工作效率,洗滌(dí)開始時注意觀察每根吸液針是否一直插入孔底並(bìng)吸幹孔内全部液體, 嚴格按照要求設(shè)置一定的洗闆時間(jiān)及洗闆次數。洗闆過程中注意沖力大小,避免沖(chōng)力過大導(dǎo)緻酶結合物丢失,吸光度值偏低。洗液應根據不同廠(chǎng)家的酶标闆調(diào)整注水量, 注意不要溢出孔外; 稀釋洗液所用的蒸餾水或去離(lí)子水酸堿(jiǎn)度适中,使配出的洗液pH 在7.2~7.6 範圍内,用非金屬容器保存,保持液體新鮮無污染、沉澱。洗闆結束後将闆拍幹, 應垂直扣在備(bèi)好的幹(gàn)淨的吸水紙或毛巾上,且注意每次更新幹(gàn)淨(jìng)的吸水紙或毛巾。
洗闆時還應注意以下問題:
(1) 需每天校正注液量及殘液量, 洗滌後殘液量不得大於2μl;
(2)及時更換破損吸液針,避免破壞底闆包被;
(3)針對不同廠(chǎng)家酶标闆注意調(diào)整吸液頭下降高度, 避免沖洗針頭卡住酶标闆;
(4)注意調整洗液量,洗液量過多将溢出,過少将達不到洗滌效果;
(5)關機前使用蒸餾水沖洗管道,避免洗液的結晶物堵塞管道;
(6)不同種試(shì)劑(jì)盒的洗液嚴禁混合使用。臨床操作中, 工作人員由於(yú)擔心洗闆次數過少達(dá)不到去除非特異性物質的理想效果而增加洗闆次數,zui近研究發現,随著(zhe)洗闆次數的增加樣本檢測(cè)的OD 值降低,造成假陰性結(jié)果及灰區标本的漏檢(jiǎn)。