ELISA實驗中,我們常常遇到導師跟我們講:關於(yú)試劑盒出現陰性、陽性和空白對照相對應的問題,陽性對照品(positive control)和陰性對照品(negative control)是檢驗試驗有效性的控制品,同時也作爲判斷結果的對照,因此對照品,特别是陽性對照品的基本組成應盡量與檢測标本的組成相一緻。本章上海恒遠生物技術探讨将爲大家具體推薦關於(yú)以上問題的解答。歡迎參(cān)考閱讀。
ELISA檢測(cè),要求嚴格按照試劑說明書要求,每次試驗、每塊扳上都要設置以下3項對(duì)照和用途下面我司技術爲您詳細介紹ELISA實驗設置陰性、陽性和空白對(duì)照的作用:
1.空白對照:僅用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測zui終反應的顯色“本底"、並(bìng)用於(yú)酶标儀消除、扣除“本底",即:以本底爲“零"讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值(A);或者,在計算陰性對照均值(NCx)、陽性對照均值(PCx)、樣本讀數的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值。
2.陰性對照(品):所謂陰性對照(品),應當是本項檢測試驗中採(cǎi)用與待撿物(樣品、人用試劑就是人的血清等)具有同源性和同質性,又不含有待檢物質,並(bìng)能客觀比較和鑒别處理因素(血清免疫學試驗中有特異性抗原與抗體反應)之間的差異。
3.陽性對照(品):
(1)陽性對照(品)的概念與要求:同陰性對照(品),隻是採用“精選"的含有待檢物質的人血清制備而成。所謂“精選",就是把收集的陽性人血清經過數種試驗進行“篩試"、把含有“幹擾性物質"的血清剔除、不用,以避免出現“假陽性"幹擾試驗結果。
(2)陽性對照(品)設置,也可區分爲兩種類型與用途:
一是陽性對照主要用於評價該項試驗結果是否有效和試驗結果的穩定性與可比性。而所設的陽性對照的測量值不列入Cutoff值計算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。
二是陽性對照的設置,不僅用於(yú)評價試驗結果是否有效和試驗結果的穩定性與可比性,而且計入Cutoff的計算。此時的Cutoff值的含義是代表該标志物在健康(正常)人群中正常值範圍的上限。待檢樣本檢測(cè)值超過該上限(Cutoff)時表示有診斷意義。