人α幹擾素（IFN-α）Elisa試劑盒使用說明書

人α幹擾素(IFN-α)酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑(jì)盒僅(jǐn)供研究使用。

檢測(cè)範(fàn)圍：                                                          96T

1μg/L - 32μg/L

使用目的：

本試劑盒用於測定人血清、血漿(jiāng)及相關(guān)液體樣本中α幹擾素(IFN-α)含量。

實驗原理

本試劑(jì)盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中人α幹擾素(IFN-α)水平。用純化的人α幹擾素(IFN-α)抗體(tǐ)包被微孔闆，制成固相抗體(tǐ)，往包被單(dān)抗的微孔中依次加入α幹擾素(IFN-α)，再與HRP标記的α幹擾素(IFN-α)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物，經過*洗滌後加底物TMB顯(xiǎn)色
。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃(huáng)色。顔色的深淺和樣品中的α幹擾素(IFN-α)呈正相關
。用酶标儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中人α幹擾素(IFN-α)濃度。 

試劑盒組成 

标本要求 

1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢(jiǎn)測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

• 标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

• 32μg/L	5号标準品	150μl的原倍标準品加入150μl标準品稀釋液
  16μg/L	4号标準品	150μl的5号标準品加入150μl标準品稀釋液
  8μg/L	3号标準品	150μl的4号标準品加入150μl标準品稀釋液
  4μg/L	2号标準品	150μl的3号标準品加入150μl标準品稀釋液
  2μg/L	1号标準品	150μl的2号标準品加入150μl标準品稀釋液

• 加樣：分别設空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣(yàng)50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋(shì)液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋(shì)度爲(wèi)5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 溫(wēn)育：用封闆膜封闆後(hòu)置37℃溫育30分鍾。   
• 配液：将30倍濃縮洗滌(dí)液用蒸餾水30倍稀釋後備(bèi)用
• 洗滌(dí)：小心揭掉封闆膜，棄(qì)去液體，甩幹，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置30秒後棄去，如此重複(fù)5次，拍幹。
• 加酶：每孔加入酶标試(shì)劑(jì)50μl，空白孔除外。 
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯(xiǎn)色：每孔先加入顯(xiǎn)色劑(jì)A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕(qīng)輕(qīng)震蕩(dàng)混勻，37℃避光顯色15分鍾.
• 終止：每孔加終止液50μl，終(zhōng)止反應(yīng)（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應在加終止液後(hòu)15分鍾以内進行。
• 加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
• 終止：每孔加終止液50μl，終(zhōng)止反應(yīng)（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應在加終止液後(hòu)15分鍾以内進行。
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