豬總抗氧化能力Elisa試劑盒使用說明書

豬總抗氧化能力Elisa試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。上海恒遠生物專業提供原裝說明書，咨詢訂購産品。
檢測範圍： 96T
0.2 U/ml – 6.5 U/ml
使用目的：
本試劑盒用於測定豬血清、血漿及相關液體樣本中總抗氧化能力（TAOC）含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中豬總抗氧化能力（TAOC）水平。用純化的豬總
抗氧化能力（TAOC）抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入總抗
氧化能力（TAOC），再與HRP 标記的總抗氧化能力（TAOC）抗體結合，形成抗體-抗原-
酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，
並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顔色的深淺和樣品中的總抗氧化能力（TAOC）呈正相
關。用酶标儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過标準曲線計算樣品中豬總抗氧化
能力（TAOC）濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶
2 酶标試劑6ml×1 瓶8 标準品（12 U/ml） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被闆12 孔×8 條9 标準品稀釋液1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份
5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封闆膜2 張
6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個
标本要求
1．标本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支
，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
6.0 U/ml 5 号标準品150μl 的原倍标準品加入150μl 标準品稀釋液
3.0 U/ml 4 号标準品150μl 的5 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
1.5 U/ml 3 号标準品150μl 的4 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
0.75U/ml 2 号标準品150μl 的3 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
0.375 U/ml 1 号标準品150μl 的2 号标準品加入150μl 标準品稀釋液
2. 加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑
，其餘各步操作相同）、标準孔、
待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度爲5 倍）。加樣将樣品加於酶标闆孔底部

，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30 分鍾。
4. 配液：将30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋後備用
5. 洗滌：小心揭掉封闆膜
，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒後棄去
，如此
重複5 次，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鍾.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止
液後15 分鍾以内進行。
操作程序總結：
計算
以标準物的濃度爲橫坐标，OD 值爲縱坐标，在坐标紙上繪出标準曲線，根據樣品的
OD 值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與OD 值計算出标
準曲線的直線回歸方程式，将樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即爲樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鍾後方可使用，酶标包被闆開封後如未
用完，闆條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本OD 值
大於标準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計
算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書爲準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月