大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)酶聯免疫分析 試劑盒使用說明書 本試劑(jì)盒僅(jǐn)供研究使用 。 檢測(cè)範(fàn)圍 ： 96T 3U/L - 120U/L 使用目的： 本試劑盒用於測定大鼠血清、血漿(jiāng)及相關(guān)液體樣本中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)含量。 實驗原理 本試劑(jì)盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平。用純化的大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)抗體(tǐ)包被微孔闆，制成固相抗體(tǐ)，往包被單(dān)抗的微孔中依次加入肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)，再與HRP标記的肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物，經過*洗滌後加底物TMB顯(xiǎn)色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃(huáng)色 。顔色的深淺和樣品中的肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)呈正相關。用酶标儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)濃度 。 試劑盒組成 1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | 2 | 酶标試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 标準品（240U/L） | 0.5ml×1瓶 | 3 | 酶标包被闆 | 12孔×8條 | 9 | 标準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 | 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封闆膜 | 2張(zhāng) | 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
标本要求 1．标本採(cǎi)集後盡早進行提取 ，提取按相關(guān)文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗 ，可将标本放於-20℃保存，但應避免反複凍融 2．不能檢(jiǎn)測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性 。 操作步驟 - 标準品的稀釋：本試劑(jì)盒提供原倍标準品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
120U/L | 5号标準品 | 150μl的原倍标準品加入150μl标準品稀釋液 | 60U/L | 4号标準品 | 150μl的5号标準品加入150μl标準品稀釋液 | 30U/L | 3号标準品 | 150μl的4号标準品加入150μl标準品稀釋液 | 15U/L | 2号标準品 | 150μl的3号标準品加入150μl标準品稀釋液 | 7.5U/L | 1号标準品 | 150μl的2号标準品加入150μl标準品稀釋液 |
- 加樣：分别設空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶标試劑(jì)，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確(què)加樣(yàng)50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋(shì)液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋(shì)度爲(wèi)5倍）。加樣将樣品加於(yú)酶标闆孔底部，盡量不觸(chù)及孔壁 ，輕輕晃動混勻。
- 溫(wēn)育 ：用封闆膜封闆後(hòu)置37℃溫育30分鍾。
- 配液：将30倍濃縮洗滌(dí)液用蒸餾水30倍稀釋後備(bèi)用
- 洗滌(dí) ：小心揭掉封闆膜，棄(qì)去液體，甩幹，每孔加滿洗滌(dí)液，靜置30秒後棄去，如此重複(fù)5次，拍幹。
- 加酶：每孔加入酶标試(shì)劑(jì)50μl，空白孔除外。
- 溫育：操作同3。
- 洗滌：操作同5。
- 顯(xiǎn)色：每孔先加入顯(xiǎn)色劑(jì)A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鍾.
- 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
- 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應在加終止液後(hòu)15分鍾以内進行。
計算 以标準物的濃度爲橫(héng)坐标 ，OD值爲縱坐标，在坐标紙上繪(huì)出标準曲線 ，根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與OD值計(jì)算出标準曲線的直線回歸(guī)方程式 ，将樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即爲樣品的實際(jì)濃(nóng)度。 注意事項 1．試劑盒從(cóng)冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後(hòu)方可使用，酶标包被闆開封後(hòu)如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。 2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋(shì)時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。 3．各步加樣均應使用加樣器 ，並(bìng)經常校對其準確(què)性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鍾内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。 - 請每次測(cè)定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測(cè)物質含量過高（樣本OD值大於(yú)标準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測(cè)定，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
- 封闆(bǎn)膜隻(zhǐ)限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存 。 7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶标儀讀(dú)數爲準. 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuán)染物處(chù)理 。 9．本試(shì)劑(jì)不同批号組分不得混用。 10. 如與英文說(shuō)明書(shū)有異，以英文說(shuō)明書(shū)爲準。 保存條件及有效期 1．試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期：6個月 |
點擊交流