大鼠D-乳酸酶聯免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用 。
檢測範圍 | 96T | | 30µg/L -1000µg/L | | 本試劑盒用於(yú)測(cè)定大鼠血清 、血漿及相關液體樣本中 D-乳酸含量 。 | | 本試劑盒應用雙抗體夾心法測(cè)定标本中大鼠 D-乳酸水平 。用純(chún)化的大鼠 D-乳酸抗體包 | | 被微孔闆，制成固相抗體，往包被單(dān)抗的微孔中依次加入 D-乳酸，再與 HRP 标記(jì)的 D-乳 | | 酸抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複(fù)合物，經過*洗滌(dí)後加底物 TMB 顯色。 TMB 在 | | HRP 酶的催化下轉化成藍色，並(bìng)在酸的作用下轉化成zui終的黃(huáng)色。顔色的深淺和樣品中的 | | D-乳酸呈正相關。用酶标儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）， 通過标準曲線計算樣品 | | 中大鼠 D-乳酸濃(nóng)度。 |
使用目的
實驗原理
試劑盒組成
| 1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 | | 2 | 酶标試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 标準(zhǔn)品（2000µg/L） | 0.5ml×1 瓶 | | 3 | 酶标包被闆 | 12 孔×8 條(tiáo) | 9 | 标準品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 | | 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 | | 5 | 顯色劑 A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封闆膜 | 2 張 | | 6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
标本要求
1．标本採集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可将标本放於-20℃保存 ，但應避免反複凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性 。
操作步驟
1. 标準品的稀釋 ：本試劑盒提供原倍标準品一支 ，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
| 1000µg/L | 5 号标準品 | 150µl 的原倍标準(zhǔn)品加入 150µl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液 | | 500µg/L | 4 号标準品 | 150µl 的 5 号标準(zhǔn)品加入 150µl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液 | | 250µg/L | 3 号标準品 | 150µl 的 4 号标準(zhǔn)品加入 150µl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液 | | 125µg/L | 2 号标準品 | 150µl 的 3 号标準(zhǔn)品加入 150µl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液 | | 62.5µg/L | 1 号标準品 | 150µl 的 2 号标準(zhǔn)品加入 150µl 标準(zhǔn)品稀釋(shì)液 |
2. 加樣 ：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、
待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
然後再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度爲 5 倍）。 加樣将樣品加於酶标闆孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封闆膜封闆後置 37℃溫育 30 分鍾。
4. 配液：将 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用
5. 洗滌 ：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此
重複 5 次 ，拍幹。
6. 加酶：每孔加入酶标試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌 ：操作同 5。
9. 顯色 ：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻， 37℃避光顯色
10 分鍾.
10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零， 450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液後 15 分鍾以内進行 。
操作程序總結：
計算
以标準物的濃度爲橫坐标， OD 值爲縱坐标 ，在坐标紙上繪出标準曲線 ，根據樣品的
OD 值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與 OD 值計算出标
準曲線的直線回歸方程式 ，将樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，
即爲樣品的實際濃度 。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用 ，酶标包被闆開封後如未
用完 ，闆條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器 ，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鍾内 ，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做标準曲線，做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大於标準品孔*孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計
算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶标儀讀數爲準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批号組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書爲準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：； 2-8℃。
2．有效期： 6 個月
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